[发明专利]人参皂苷Rg1分子印迹材料,其制备方法,其应用

说明书

技术领域：

本发明专利涉及合成及其在靶向分离中应用的领域，具体涉及人参皂苷Rg1分子印迹材料的制备及利用该材料为固相萃取剂分离、纯化植物中的Rg1拟似物的方法。

背景技术：

(1)人参皂苷Rg1具有促进神经干细胞增殖的作用，对于脑卒中后遗症、神经退行性病变等疾病的治疗有重要作用。鉴于临床缺乏促神经干细胞增殖的药物，利用Rg1为模板，合成分子印迹材料，从中药、民族药、天然植物中靶向筛选活性成分有重要意义。

(2)中草药所含成分复杂，为了提高中草药的治疗效果，就要尽最大限度提取有效成分，去除无效成分及有毒成分。因此，中草药活性成分分离提取对于提高中药制剂的内在质量和临床疗效都极为重要。传统中药活性成分的分离提取常采用硅胶柱、C₁₈键合相柱、Al₂O₃柱等利用成分的吸附系数差异实现分离，但最大缺点是选择性差，富集容量低，尤其对一些结构复杂，多手性碳原子，且含量低的活性化合物，分离提纯难度大，采用这些常规分离手段往往需要反复操作，提取率极低，手性构型可能因此改变而失活。分子印迹材料是为模板分子量身定做的高分子材料，由于其经洗脱模板分子后，能留下在形状、大小以及识别位点都与模板分子相匹配的空穴，该空穴能重新识别模板分。由于其兼有高效、稳定和特异选择性且合成价格低廉的特点，因而具有较广泛应用前景。

发明内容：

本发明的目的在于避免常规中药提取方法技术存在的问题，建立一种基于Rg1印迹材料为新型吸附分离材料，并以此作固相萃取柱的固定相从中药粗提物中定向分离、富集Rg1拟似物的方法，由此可以获得高提取率的目标成分。本发明通过以下的技术方案实现的，具体包括步骤如下：

1.Rg1印迹材料的制备：

(1)将Rg1、功能单体和交联剂按照质量比10∶360∶3600溶解在装有70mL致孔剂乙腈溶液的圆底烧瓶中；

(2)再加入引发剂偶氮二异丁腈80mg后，通氮气脱氧15min；

(3)将密封好的圆底烧瓶放入冰水浴中，紫外灯照射24h，使聚合完全；

(4)将制得的材料用10％(W/V)十二烷基硫酸钠(SDS)的0.2mol/L氢氧化钠溶液混合液反复洗涤后，用紫外光谱检测直至无模板分子吸收为至。以甲醇为溶剂，通过索氏提取的方法洗去模板分子及没有聚合的功能单体及交联剂，洗脱液以紫外光谱进行检查直至检测不 到以上物质的吸收为止，最后用去离子水洗涤材料至中性。

(5)将除去模板分子的材料真空干燥2h，获得Rg1分子印迹材料；

(6)非印迹材料的制备方法，除不加入模板分子外，其余步骤同上。

2.固相萃取分离纯化中药粗提液中的Rg1拟似物：

(1)固相萃取分离纯化中药粗提物中的Rg1拟似物：称取药材粉末(过50目筛)5.0g，加入甲醇提取液40mL，浸泡1h后，放入超声波中超声40min后，旋转蒸发至干，用甲醇溶解并定容至5mL，备用；

(2)将上述得到的Rg1分子印迹材料采用干法装柱填充到固相萃取柱中，并用甲醇溶液平衡柱子；取野沙参药材粗提取液5mL上样后，用甲醇洗脱保留在萃取柱中的Rg1，将洗脱液收集并浓缩、干燥，即得到高纯度的Rg1。

本发明制备的分子印迹材料形貌为规则球形且单分散，粒径4-20μm左右，对Rg1拟似物具有很好的识别性能，作为固相萃取的填料，可用于中药中Rg1拟似物成分的高效分离、富集及纯化。

与C₁₈键合固相萃取柱，硅胶固相萃取柱及非印迹材料萃取柱相比，Rg1印迹固相萃取柱对提取液中的Rg1拟似物有更好的选择性，柱容量最高，达到6mg/g，是C₁₈键合固相萃取柱和硅胶固相萃取柱的4-6倍，非印迹材料固相萃取柱的4倍。同时洗脱率达到94％，亦高于其它吸附剂固相萃取柱。

附图说明：

附图1是人参皂苷Rg1分子式。

具体实施方式：

下面对本发明的实施例作详细说明：本实施例在以本发明技术方案为前提下进行实施，给出了详细的实施方案和具体的操作过程，但本发明的保护范围不限于下述的实施例。

实施例1：

1.Rg1分子印迹材料的优选制备方法：