[发明专利]一种具有肾脏保护作用的短肽及其制备方法和应用

说明书

技术领域

本发明涉及一种具有肾脏保护作用的短肽及其制备方法和应用，其序列及结构来源于促红细胞生成素（erythropoietin, EPO）B螺旋的表面肽段（Helix B surface peptide，HBSP）。

背景技术

肾脏缺血缺氧导致能量代谢不足、ATP过度耗竭，再灌注过程又产生大量氧自由基，两者均可导致肾小管上皮细胞调亡，使肾功能严重受损。同时，在缺血过程中，大量炎症细胞募集至肾小管间质内，释放各种炎性介质，不仅造成肾组织直接损伤，也可引起肾血管内皮细胞损伤和免疫原性增强，并进一步导致免疫性血管损伤。临床上引起肾缺血再灌注损伤的原因主要有心血管疾病、脓毒症、创伤和外科手术等。而近来随着肾移植手术逐渐增加，因缺血再灌注损伤导致的移植肾功能延迟恢复和慢性移植物肾病严重影响了手术效果和病人预后。虽然近年来对肾缺血再灌注损伤的实验及临床研究不断深入，并已开发多种肾脏保护作用的药物，但其总体疗效均不确切。

促红细胞生成素（EPO）在临床上广泛应用于纠正尿毒症患者的肾性贫血。近年来研究显示，EPO在肾脏组织局部与受体结合后，可通过多条信号途径抑制半胱天冬酶（caspase）活化、维持线粒体膜电位、促进糖酵解及腺苷三磷酸（ATP）合成，从而减少肾小管上皮细胞凋亡。此外，EPO亦能下调缺血再灌注损伤后肾组织局部的白介素1（IL-1）、白介素6（IL-6）、肿瘤坏死因子α（TNF-α）、巨噬细胞趋化蛋白-1(MCP-1)及Toll样受体-4（TLR-4）等炎症因子和受体的表达，显著抑制缺血后肾小管间质炎症细胞浸润，并通过NF-κB途径下调局部炎症反应。虽然EPO显示出良好的肾组织保护作用，但其在临床治疗中亦具有增加血粘度、促进血栓形成、促进肿瘤形成及导致高血压等不良反应。并且EPO的组织保护作用呈剂量依赖性，且剂量阈值明显高于发挥促红作用的正常剂量，将导致不良反应发生的概率大大增加。因此，如何既保留EPO的组织保护效应又避免促红作用带来的不良反应已成为其能否应用于临床肾保护治疗的关键。

发明内容

本发明的目的是提供一种具有肾脏保护作用的短肽及其制备方法和应用，所述短肽既能保留EPO的组织保护效应又能避免促红作用带来的不良反应。

为了达到上述目的，本发明提供了一种具有肾脏保护作用的短肽，其特征在于，氨基酸序列是QEQLERALNSS。该序列及结构来源于EPO的B螺旋表面肽段（Helix B surface peptide，HBSP）。

本发明还公开了上述具有肾脏保护作用的短肽的制备方法，其特征在于，具体步骤为：在以树脂为载体的丝氨酸上依次偶联Ser、Asn、Leu、Ala、Arg、Glu、Leu、Gln、Glu和Gln，裂解后，用冰乙醚沉降得到粗肽；经HPLC纯化得到产品。本发明的短肽也可采用常规的氨基酸偶联方法合成。

本发明还公开了上述具有肾脏保护作用的短肽在制备治疗肾缺血再灌注损伤的制剂中的应用。

本发明还公开了上述具有肾脏保护作用的短肽在制备治疗肾缺血再灌注损伤导致的急性肾小管坏死的制剂中的应用。

本发明还公开了上述具有肾脏保护作用的短肽在制备治疗肾缺血再灌注损伤导致的肾组织局部炎症的制剂中的应用。

本发明还公开了上述具有肾脏保护作用的短肽在制备治疗肾缺血再灌注损伤导致的肾小管上皮细胞凋亡的制剂中的应用。

本发明还公开了上述具有肾脏保护作用的短肽在制备器官移植保护液中的应用。

本发明制备的短肽HBSP的优点是：

1、提供了一种防、治肾缺血再灌注损伤的新型临床药物，为肾移植病人带来福音；

2、可作为器官移植保存液的一种成分；

3、研究证实几乎无副作用；

4、为短肽类药物，生物活性高，安全性好；

5、转化为临床药物容易，进一步应用前景光明。

本发明的制备过程稳定可靠，技术成熟，易于操作，制备效率较高。

附图说明

图1为 EPO与(EPOR)₂结合的空间构象图；

图2为HBSP序列示意图；

图3为HPLC检测图谱；

图4为分子量鉴定图；

图5为术后48h 血清肌酐及尿素氮水平测定图；

图6为肾脏组织切片HE染色及损伤病理评分(200x)图；

图7为肾脏组织TUNEL染色图；

图8为TUNEL阳性细胞百分数图；

图9为肾组织局部单核/巨噬细胞浸润图；

图10为HBSP与EPO促红作用比较图。

具体实施方式