[发明专利]重组β淀粉样肽B细胞表位多肽嵌合抗原、其制备方法和应用

说明书

技术领域

本发明涉及生物制药和基因工程技术领域，具体涉及重组β淀粉样肽B细胞表位多肽嵌合抗原、其制备方法和应用。

背景技术

阿尔茨海默病(Alzheimer’s disease，AD)是一种以认知功能障碍和记忆减退为主要临床特征的神经退行性疾病，是老年痴呆的主要形式。最新统计显示全世界大约有2700万人受到AD的影响，而我国的AD患者高达1000万，并且每年以30万的速度增长，给社会和家庭造成了沉重的经济负担。目前临床上治疗AD的药物主要有乙酰胆碱酯酶抑制剂和NMDA(N-甲基-D-天冬酰胺)拮抗剂等，但是这些药物只能减轻患者的症状，却不能有效治疗AD。

淀粉样蛋白级联假说(Amyloid cascade hypothesis)被认为是AD的致病机制。淀粉样肽(β-amyloid，Aβ)由淀粉样前体蛋白(β-amyloid precursor protein，APP)经β-分泌酶和γ-分泌酶剪切加工后生成，裂解为具有40、42或43个氨基酸的淀粉样肽(Aβ)分子，具有自我聚合的能力，因而能够在细胞外聚集成寡聚体，导致纤维化进而形成淀粉样沉积。而阿尔茨海默病就是由于患者大脑内堆积了过多的Aβ，产生了神经毒性，直接导致了神经元功能的障碍及减退，或进而导致tau蛋白的过度磷酸化而产生神经纤维缠结，间接导致神经元功能的减退。目前人们普遍认为，过多的Aβ是诱发AD发病机制的核心，是AD形成和发展的关键；所以，以淀粉样肽(Aβ)为靶标，研制疫苗阻断或清除Aβ堆积，是预防和治疗阿尔茨海默病(AD)的一种有效策略。

1999年，Schenk等首次报道了利用人纤维化的Aβ42多肽联合弗氏佐剂免疫AD转基因小鼠(Tg2576)(参见Schenk D，et al.，Nature，1999，400：173-7)。此后，Elan和Wyeth采用Aβ42进行了临床试验，但在II a期临床试验中，6％的受试者出现了急性脑膜炎，从而导致实验终止(参见Orgogozo JM，et al.，Neurology，2003，61：46-54)。大多数人认为，出现脑膜炎的原因是产生了Th1型细胞免疫反应(参见Cribbs DH，et al.，Int Immunol，2003，15：505-14)。尽管如此，那些治疗后产生针对Aβ的抗体的患者相比未接受治疗的患者，认知能力下降的速度明显减缓(参见Hock C，et al.Neuron，2003，38：547-54)。因此，只要避免免疫治疗后的有害副作用，以Aβ为靶标的主动免疫方法治疗阿尔茨海默病还是十分有希望的。经过分析得知，Aβ1～42当中存在一个B细胞表位(第1～15位)及两个T细胞表位(第17～21和29～42位)。这个重要发现使人们研究AD主动免疫时更倾向于使用单独B细胞表位，并去除有害的T细胞表位，让疫苗达到促进抗体生成的目的，且从根本上避免之前临床试验所产生的Th1型细胞不良反应。基于以上研究结果，结合AN-1792疫苗在病人体内应用失败的原因，爱尔兰的Elan和美国的 惠氏公司合作开发了一种新疫苗ACC-001，目前该疫苗正进行II期临床试验。ACC-001以白喉毒素突变体(CRM197)为载体蛋白，体外偶联Aβ多肽序列N端，以QS21作为佐剂。同时，Novartis公司制备的CAD106疫苗(Aβ多肽序列N端连接Qb颗粒)，Affiris公司制备的Affitope疫苗(用一段短多肽模拟天然Aβ序列的一部分作为抗原成分)，以及Merck公司制备的V950(Aβ多肽序列N端连接ISCOMATRIX)也正在进行I或II期临床试验。最近，基于Aβ表位的阿尔茨海默病DNA和重组病毒载体疫苗也得到了研究。除此之外，也可设计重组的免疫原作疫苗来治疗阿尔茨海默病；如Moretto等报道了重组Aβ多肽蛋白疫苗，利用大肠杆菌表达包含Aβ的重组蛋白Trx-4/8Aβ(1～15)，获得的重组蛋白经纯化后免疫小鼠，产生了良好的免疫反应，可作为候选疫苗，但该重组蛋白抗原含有Trx蛋白不能够应用于人类，需要进一步优化改选(参见Moretto N，et al.，JBiological Chemistry，2007，282：11436-45)。