[发明专利]一种转Bar基因水稻的溯源检测方法

权利要求书

1.一种转Bar基因水稻的多重PCR溯源检测方法，包括如下步骤：

(1)提取水稻基因组DNA；

(2)以步骤(1)提取的水稻基因组DNA为模板，对35S启动子、NOS终止子、SPS水稻内源基因、Bar基因进行多重PCR扩增；

(3)将扩增产物进行凝胶电泳，并根据电泳结果判断样品是否属于转Bar基因水稻或转Bar基因水稻制品；

其特征在于：所述的多重PCR扩增引物为：

所述判断依据为：如果凝胶电泳能够检测出35S启动子、Bar基因或NOS终止子以及SPS水稻内源基因特异性扩增产物条带则说明该样品为转Bar基因水稻或转Bar基因水稻制品。

2.根据权利要求1所述的转Bar基因水稻的多重PCR溯源检测方法，其特征在于所述的多重PCR扩增反应体系为：12.5μL预混液，浓度均为10μmol/L的35S，NOS，Bar，SPS引物分别为0.5，0.5，0.2，1.0μL，100ng模板DNA，加无菌水至25μL；其中所述的预混液由12.5U的DNA聚合酶；dNTP各0.4mmol/L；50mmol/L KCl；10mmol/L pH8.4 Tris-HCl；1.5mmol/L MgCl₂组成。

3.根据权利要求1所述的转Bar基因水稻的多重PCR溯源检测方法，其特征在于所述的多重PCR扩增反应条件为预变性94℃ 5min；变性94℃ 1min，退火57℃ 1min，延伸72℃ 1min，40个循环；72℃延伸7min。

4.根据权利要求1所述的转Bar基因水稻的多重PCR溯源检测方法，其特征在于所述的水稻基因组DNA提取包括以下步骤：

(A)称取20mg样品，粉碎后置于1.5mL离心管中，加入200μL 0.25mol/L NaOH溶液，95℃20s；

(B)加入150μL 0.25mol/L HCL溶液和150μL 0.5mol/L pH8.0Tris-HCL，85℃3min；

(C)加入400μL的三氯甲烷，颠倒混匀离心管2-3次，静置10min；12000g离心5min，上清液即为水稻基因组DNA提取液。

5.根据权利要求1所述的转Bar基因水稻的多重PCR溯源检测方法，其特征在于步骤(1)提取的水稻基因组DNA浓度达到20ng/μl以上，纯度达到在A260/280在1.5-2.0之间才能作为步骤(2)多重PCR扩增反应模板。

6.根据权利要求4所述的转Bar基因水稻的多重PCR溯源检测方法，其特征在于所述的样品为水稻稻米或稻米的初级加工品。

7.根据权利要求4所述的转Bar基因水稻的多重PCR溯源检测方法，其特征在于所述的稻米的初级加工品为大米、米饭、米粉、米线或米酒酒糟。

8.根据权利要求1所述的转Bar基因水稻的多重PCR溯源检测方法，其特征在于所述步骤(3)中使用的凝胶电泳为使用3.0％的琼脂糖凝胶在85V条件下电泳30min。