[发明专利]一种能提高机体免疫力的南极适冷微生物胞外多糖

说明书

技术领域

本发明涉及一种能提高机体免疫力的南极适冷微生物胞外多糖，属于医药及保健食品技术领域。

背景技术

南极海洋终年覆盖冰雪，地理环境和气候特征都十分特殊，在这种极端环境中生存的微生物具有高度的多样性，这种多样性为开发具有特殊应用价值的活性物质提供了丰富的资源。南极微生物产生的胞外多糖能够缓解低温和高盐对菌体的伤害，是一种很好的抗冻保护剂，在微生物适应南极低温高盐的恶劣环境中发挥了重要的低温保护作用。南极微生物胞外多糖的结构新颖，功能独特，是开发新型多糖类免疫调节剂的重要资源。如南极微生物Pseudoaltermonas sp.S-15-13所产生的胞外多糖，是一种分子量为62kDa的甘露聚糖，这种胞外多糖具有一定的免疫活性。(Production and characterization of anextracellular polysaccharide of antarctic marine bacteria Pseu

南极适冷细菌Pseudoal termonas sp.S-5，属于假交替单胞菌属。菌体呈杆状，生理生化鉴定结果表明，该菌革兰氏染色阴性，兼性厌氧，氧化酶、接触酶、尿素酶、赖氨酸脱羧酶、精氨酸脱羧酶、精氨酸双水解酶反应呈阳性；硝酸盐还原反应、吲哚试验、明胶液化试验、H2R试验、MR试验、VP试验、ONPG试验、鸟氨酸脱梭酶反应均呈阴性。

南极适冷细菌Pseudoal termonas sp.S-5的发酵液，可应用于植物及农作物抗冷方面，如公开号为CN101775361A(申请号200910256034.6)的中国专利，其中的抗冻活性物质即为南极适冷细菌Pseudoaltermonas sp.S-5所产生的胞外多糖，该多糖的分子量约为39,7046Da，而这种胞外多糖在提高机体免疫力方面的功效还未见报道。

发明内容

本发明针对现有技术的不足，提供一种能提高机体免疫力的南极适冷微生物胞外多糖及其在提高机体免疫力方面的应用。

一种能提高机体免疫力的南极适冷微生物胞外多糖的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：

(1)将菌种保藏号为CGMCC NO.3433的南极适冷细菌(Pseudoaltermonas sp.)S-5活化后，接种于Zobell 2216E液体培养基中，6-10℃培养22-25小时，按1-2wt％量接种于Zobell 2216E液体培养基扩大培养，得扩繁菌种；

(2)将步骤(1)制得的扩繁菌种按8-12wt％的接种量，接种于液体发酵罐中的发酵培养基，7-9℃有氧搅拌培养50-60h，搅拌速度150-180r/min，得液体发酵液；

(3)将步骤(2)制得的液体发酵液在12000r/min下离心15min，收集上清液；

(4)将步骤(3)制得的上清液浓缩至原体积的1/4，得浓缩液，然后向浓缩液中加入三倍体积的95％乙醇，过夜沉淀，离心，收集沉淀；

(5)将步骤(4)收集的沉淀用水溶解，得溶解液，然后加入seveage试剂脱去蛋白质，制得粗糖溶液；

(6)将步骤(5)制得的粗糖溶液通过大孔树脂D-301R脱色后，经过DEAE-Fast Flow阴离子交换柱和Sephadex G-75层析柱分离，制得纯化的胞外多糖溶液；

(7)将步骤(6)制得的胞外多糖溶液经真空冷冻干燥后，制得能提高机体免疫力的南极适冷微生物胞外多糖。

所述步骤(1)中的Zobell 2216E液体培养基组分如下，均为重量百分数：蛋白胨0.5％，酵母粉0.1％，葡萄糖2％，人工海水余量，pH7.0。

所述步骤(2)中的发酵培养基组分如下，均为重量百分数：蛋白胨0.5％，酵母粉0.1％，葡萄糖2％，氯化钠2％，人工海水余量，pH7.0。

所述步骤(2)的搅拌培养前还包括向发酵培养基中加入发酵培养基重量0.3％的灭菌豆油。灭菌的豆油作为消泡剂来消除在搅拌过程中产生的气泡。

所述步骤(3)中的离心条件为：12000r/min，15min。

所述步骤(4)中的浓缩条件为：60℃，旋转蒸发；浓缩液约为上清液体积的1/4。

所述步骤(5)的seveage试剂由氯仿和正丁醇按照体积比4∶1构成；seveage试剂的添加量为溶解液体积的1/3。

所述人工海水为Instant Ocean Reef Crystals海水盐配制。