[发明专利]转基因玉米MON88017转化事件外源插入载体旁侧基因及其应用

权利要求书

1.转基因玉米MON88017转化事件外源插入载体旁侧基因，其特征在于：其序列如序列表中1所示，具体如下：

aaattttgtc ctgaacccct aaaatcccag gaccgccacc tatcatatac atacatgatc    60

ttctaaatac ccgatcagag cgctaagcag cagaatcgtg tgacaacgct agcagctctc    120

ctccaacaca tcatcgacaa gcaccttttt tgccggagta tgacggtgac gatatattca    180

attgtaaatg gcttcatgtc cgggaaatct acatggatca gcaatgagta tggtggtcaa    240

tatggagaaa aagaaagagt aattaccaat tttttttcaa ttcaaaaatg tagatgtccg    300

cagcgttatt ataaaatgaa agtacatttt gataaaacga caaattacga tccgtcgtat    360

ttataggcga aagcaataaa caaattattc taattcggaa atctttattt cgacgtgtct    420

acattcacgt ccaaatgggg gcttagatga gaaacttcac gatttggcgc gccaaagctt    480

actcgaggtc attcatatgc ttga                                           504。

2.权利要求1所述的转基因玉米MON88017转化事件外源插入载体旁侧基因的提取方法，其特征在于，步骤如下：

(1)提取转基因玉米Mon88017基因组DNA：采用Dra I、EcoR V、Pvu II、Stu I四种限制性内切酶进行充分酶切，并对酶切产物进行纯化；

(2)引物设计：利用BD GenomeWalker试剂盒提供的接头引物AP1和AP2，其序列分别为：

AP1：5′-GTAATACGACTCACTATAGGGC-3′；

AP2：5′-ACTATAGGGCACGCGTGGT-3′；

另外，参照Mon88017插入载体结构序列设计引物序列如下：

P-ractgsp1：5′-CTTTAGGACTTTAGGGGTTGTT-3′；

P-ractgsp2：5′-GGACTATCCCGACTCTCTTC-3′；

(3)以转基因玉米MON88017基因组酶切产物为模板进行两轮PCR扩增：引物对AP1和P-ractgsp1用于第一轮PCR反应，扩增体系20μL，PCR程序为94℃25s，72℃3min，6个循环；94℃25s，64℃30s，36个循环；64℃延伸7min，1个循环；引物对AP2和P-ractgsp2用于第二轮PCR，在第二轮PCR中用1μL第一轮扩增产物的50倍稀释液作为模板，PCR扩增体系和反应程序与第一轮PCR相同；第二轮PCR产物即为转基因玉米MON88017转化事件外源插入载体旁侧基因。

3.权利要求1所述的转基因玉米MON88017转化事件外源插入载体旁侧基因应用于特异性定性检测玉米及相关产品是否含有MON88017转化事件。

4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于：定性检测时，方法如下：

(1)首先，根据转基因玉米MON88017转化事件外源插入载体旁侧基因的序列设计引物，引物序列如下：

Mon88017-F：5′-TCCTGAACCCCTAAAATCCC-3′；

Mon88017-R：5′-TTTCTCATCTAAGCCCCCAT-3′；

(2)提取待检测样品的基因组DNA，并以此为模板，利用Mon88017-F和Mon88017-R引物组合进行PCR扩增；

(3)上述PCR扩增产物以琼脂糖凝胶电泳分离，EB染色后鉴定是否存在扩增产物；若存在扩增产物，则待检测样品含有MON88017转化事件；若不存在扩增产物，则待检测样品中不含有MON88017转化事件。