[发明专利]利用半胱氨酸蛋白酶增强植物介导的昆虫RNA干扰

权利要求书

1.一种利用半胱氨酸蛋白酶增强植物介导的昆虫RNA干扰的方法，所述植物的细胞内已转入了表达昆虫基因dsRNA的构建物，其特征在于，所述方法包括将表达植物半胱氨酸蛋白酶的构建物转入所述植物的细胞、组织或器官中。

2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述昆虫基因是昆虫生长必需的基因，或在特定条件下能影响昆虫生长发育的基因。

3.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的植物选自：双子叶植物、单子叶植物、或裸子植物。

4.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的昆虫选自植食性昆虫。

5.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述植物半胱氨酸蛋白酶选自：棉花半胱氨酸蛋白酶或拟南芥半胱氨酸蛋白酶。

6.如权利要求1或5所述的方法，其特征在于，所述植物半胱氨酸蛋白酶选自

(1)SEQ ID NO：1或SEQ ID NO：2所示的氨基酸序列，或

(2)与SEQ ID NO：1或SEQ ID NO：2所示的氨基酸序列有50％以上同源性且具有SEQ ID NO：1或SEQ ID NO：2所示的氨基酸序列相同生物活性的蛋白酶。

7.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述表达昆虫基因dsRNA的构建物为双链，并且其正链或负链含有以下式I结构：

Seq_正向-X-Seq_反向    式I

式中，

Seq_正向为昆虫基因的正向序列或片段，其中所述片段的长度至少为50bp；

Seq_反向为跟Seq_正向基本上互补的序列或片段，其中所述片段的长度至少为50bp；

X为位于Seq_正向和Seq_反向之间的间隔序列，并且所述间隔序列与Seq_正向和Seq_反向不互补。

8.如权利要求1所述的方法，该方法还包括使所述植物的细胞、组织或器官再生成植株。

9.一种植物细胞，其特征在于，所述的植物细胞中含有表达昆虫基因dsRNA的构建物以及表达植物半胱氨酸蛋白酶的构建物。

10.如权利要求9所述的植物细胞，其特征在于，所述植物半胱氨酸蛋白酶选自棉花半胱氨酸蛋白酶或拟南芥半胱氨酸蛋白酶。

11.如权利要求10所述的植物细胞，其特征在于，所述的植物选自：双子叶植物、单子叶植物、或裸子植物。

12.一种提高植物抗虫性的方法，其特征在于，所述方法包括将表达昆虫基因dsRNA的构建物以及表达植物半胱氨酸蛋白酶的构建物转入植物细胞、组织或器官中。

13.一种转基因植物、其组织或其后代，其特征在于，其含有权利要求9所述的植物细胞。

14.如权利要求13所述的转基因植物、其组织或其后代，其特征在于，所述转基因植物、其组织或其后代是植物种子。

15.一种生产转基因植物的方法，所述转基因植物具有改善的抗虫性，该方法包括使转入了表达昆虫基因dsRNA的构建物的亲本植物与转入了表达植物半胱氨酸蛋白酶的构建物的亲本植物杂交，筛选并获得所述昆虫基因dsRNA和所述植物半胱氨酸蛋白酶共同表达的植物后代。

16.一种生产转基因植物的方法，所述转基因植物具有改善的抗虫性，该方法包括将表达昆虫基因dsRNA的构建物以及表达植物半胱氨酸蛋白酶的构建物转入植物细胞、组织或器官中，使所述植物细胞、组织或器官再生成植株。

17.用权利要求15或16所述的方法获得的转基因植物。