[发明专利]补体结合酶联免疫吸附试验

说明书

技术领域

本发明涉及一种基于补体结合的抗原抗体免疫学检测方法，属免疫学技术领域。

技术背景

任何抗原抗体复合物具有激活、固定补体的特性，以此建立的补体参与的免疫学检测技术，具有高度的特异性。而酶标记的显色系统可用于揭示抗原抗体反应，具有极高的灵敏度，已广泛应用于特异性免疫学检测。基于补体参与的补体结合(complementary fixation，CF)试验和以酶标记显色系统作为指示系统的酶联免疫吸附试验(ELISA)技术已广泛应用与抗原抗体特异性反应的免疫学检测。

CF试验是用免疫溶血机制做指示系统，来检测另一反应系统的抗原与抗体特异性反应的试验。早在1906年Wasermann就将其应用于梅毒的诊断，即著名的华氏反应。这一传统的试验经不断改进，除了用于传染病诊断和流行病学调查以外，在一些自身抗体、肿瘤相关以原以及HLA的检测和分析中也有应用。

该试验中有5种成分参与反应，分属于3个系统：①反应系统，即已知的抗原(或抗体)与待测的抗体(或抗原)；②补体系统；③指示系统，即绵羊红血球与相应抗血清(溶血素)，试验时常将其预先结合在一起，形成致敏红细胞。反应系统与指示系统争夺补体系统，先加入反应系统给其以优先结合补体的机会。如果反应系统中存在待测的抗体(或抗原)，则抗原抗体发生反应后可结合补体；再加入指示系统时，由于反应液中已没有游离的补体而不出现溶血，是为补体结合试验阳性。如果反应系统中不存在待检的抗体(或抗原)，则在液体中仍有游离的补体存在，当加入指示系统时会出现溶血，是为补体结合试验阴性。因此补体结合试验可用已知抗原来检测相应抗体，或用已知抗体来检测相应抗原。

CF试验是一种补体参与的传统免疫学技术，人和动物许多疫病的诊断采用此方法。CF试验主要应用在以下几方面：①传染病诊断。包括病原性抗原及相应抗体的检测。②其他抗原的检测。例如肿瘤相关抗原、血迹中的蛋白质鉴定、HLA分型等。③自身抗体检测。

CF试验方法的主要优点有：①特异性强。出现交叉反应的机率较小。②应用面广。可用于检测多种类型的抗原或抗体。

CF试验方法的主要缺点是技术操作繁锁、难以标准化和灵敏度不高。

ELISA也已是一种广泛使用的免疫学技术。该技术是用酶标记物参与抗原或抗体的特异性免疫反应，以酶底物显色，通过显色程度来揭示抗原抗体特异性反应的程度。

ELISA广泛用于检测一切抗原、抗体及半抗原。已成为免疫检测中的主要技术之一。

ELISA的主要优点有：①具有高灵敏度和良好特异性。②操作简便，可实现高通量检测，试剂易于标准化。③应用面广。可用于检测多种类型的抗原或抗体。

补体结合试验与ELISA的主要不同在于：补体结合试验有补体参与，抗原抗体的特异性反应程度通过有否剩余补体参与溶血系统反应导致红血球溶血而体现；ELISA无补体参与，指示系统是酶显色系统，而不是溶血系统。

发明内容

1.要解决的技术问题

本发明是建立一种基于补体结合的检测抗原抗体特异性反应的免疫学试验技术——补体结合酶联免疫吸附试验(CF-ELISA)技术。

本发明通过利用酶标记抗补体单克隆抗体或多克隆抗体及酶显色剂作为指示系统，来显示是否存在有补体参与的抗原抗体特异性反应，可用已知抗原来检测相应抗体，或用已知抗体来检测相应抗原。

本技术发明利用了CF试验和ELISA的优点，达到建立一种高特异、高敏感、便于标准化和使用方便的新型免疫学检测技术的目的。

2.解决其技术问题采用的技术方案

包被抗原或抗体制备，及用抗原或抗体包被酶联反应板；阴性和阳性血清标准品的制备；

补体和酶标补体抗体的制备；试剂的配制(包括样品稀释液、底物液A、底物液B、终止液、20倍浓缩洗涤液)。

本发明详细描述

1.试验所需组分及其制备

(1)CF-ELISA板的包被

本发明试验中所涉及的抗原和抗体有布鲁氏菌、炭疽杆菌、鼻疽杆菌、钩端螺旋体、牛结核分枝杆菌、副结核分枝杆菌、禽结核分枝杆菌、耶尔辛氏菌O:9等病原微生物及其感染动物的血清。由以上病原菌按常规方法制备的包被用抗原，以上的感染动物血清为包被用抗体。