[发明专利]一种用于细胞复合培养的肝组织工程支架及其制备方法

权利要求书

1.一种用于细胞复合培养的肝组织工程支架，其特征在于：由具有流道结构(3)的薄膜支架(1)与具有细胞培养结构(4)的微米级多孔支架(2)重叠后卷裹构成。

2.根据权利要求1所述的一种用于细胞复合培养的肝组织工程支架，其特征在于：所述的薄膜支架(1)上加入促血管生长因子，而多孔支架(2)上加入肝细胞生长因子。

3.根据权利要求1所述的一种用于细胞复合培养的肝组织工程支架，其特征在于：所述的流道结构(3)利用快速成型技术进行直接成型。

4.根据权利要求1所述的一种用于细胞复合培养的肝组织工程支架，其特征在于：所述的薄膜支架(1)表面涂覆一层100～300μm的胶原蛋白或明胶。

5.根据权利要求1所述的一种用于细胞复合培养的肝组织工程支架，其特征在于：所述的薄膜支架(1)材料采用丝素蛋白、壳聚糖或PLGA。

6.根据权利要求1所述的一种用于细胞复合培养的肝组织工程支架，其特征在于：所述的多孔支架(2)材料采用胶原蛋白、明胶或海藻酸钠。

7.一种用于细胞复合培养的肝组织工程支架的制备方法，其特征在于：包括下列步骤：

1)、通过计算机设计矩形的3D数字模型，矩形厚度为1～2mm，矩形的一侧表面上设有宽度为200μm～1mm、深度为300～700μm的凹槽结构，将数字模型通过快速成型技术制造出快速原型，再用硅橡胶(PDMS)翻模，制备出薄膜支架软模具负型和多孔支架软模具负型；

2)、采用丝素蛋白、壳聚糖或PLGA作为制造薄膜支架的材料，控制其动力粘度在60～80Pa·s，并用磁力搅拌器搅拌6h以上，备用；

3)、采用胶原蛋白、明胶或海藻酸钠作为制造多孔支架的材料，溶液中所有溶质的质量分数为5％-10％，并用磁力搅拌器充分搅拌6h以上，备用；

4)、将薄膜支架材料溶液灌注于薄膜支架软模具负型上，在真空度＜50Pa的环境下保持3～10min，抽出底层气泡，然后取出静置于室温常压环境下自然晾干，脱模，即得薄膜支架；

5)、将多孔支架材料溶液灌注入多孔支架软模具负型上，-20℃以下预冻3h后进行冷冻干燥24～48h，真空度维持在20Pa以下，完全干燥后取出脱模即得多孔支架，微孔直径在50～120μm范围内；

6)、分别在薄膜支架上种植血管内皮细胞，在多空支架上种植肝细胞，然后重叠卷起，端部用医用生物胶固定，得到圆柱外形的肝组织工程支架，然后进行体外培养或体内植入。