[发明专利]一种疫苗制备过程中裂解剂的去除方法

说明书

技术领域

本发明属于疫苗制备领域，尤其是一种疫苗制备过程中裂解剂的去除方法。

背景技术

流感病毒裂解疫苗在制备过程中要使用裂解剂将全病毒颗粒裂解为小分子，从而使病毒失去感染性而保留抗原有效成分血凝素(HA)和神经氨酸酶(NA)以及部分M蛋白和NP蛋白制备而成。目前流感病毒裂解疫苗使用的裂解剂有Triton X-100、乙醚、聚山梨酸酯80(Polysothat 80)、脱氧胆酸钠(Sodium deoxyholate)等，但使用最多的是Triton X-100。流感病毒裂解疫苗在裂解病毒后要将裂解剂去除，以防止疫苗中残留过多而发生副反应。

一般裂解时Triton X-100的添加浓度是0.2％～1％，而2010版中国药典要求的半成品中Triton X-100的残留量应小于300μg/ml。常用的去除裂解剂的方法有超速区带离心法、超滤法、透析法、层析法等。Triton X-100的分子量为646.86，与流感病毒血凝素HA的分子量(76kD)差异巨大，从理论上来讲可以通过以上方法去除，但实际并不能完全去除。这是由于在纯化过程中HA易与TritonX-100聚集在一起而难以分离。

发明内容

本发明的目的在于克服现有技术的不足，而提供一种疫苗制备过程中裂解剂的去除方法，该方法采用高浓度磷酸盐缓冲液(PB)与裂解剂Triton X-100发生特异性凝集反应，再通过离心和过滤方法去除裂解剂。

本发明解决其技术问题采用的技术方案：这种疫苗制备过程中裂解剂的去除方法，该方法步骤如下：在流感病毒裂解完成后向裂解液中按体积比1∶1.5-3加入1-1.5mol/L、pH7.2-7.5的磷酸盐缓冲液，等到出现白色絮状物时将样品装入离心杯中3000r/min离心20min，收集上清液，再经0.22μm-0.45μm滤膜过滤即可。

本发明有益的效果是：

1、特异性强：高浓度的PB只与裂解剂发生特异性凝集反应，而不与HA等抗原发生此反应。

2、裂解剂去除效率高。目前国内厂家大多数流感疫苗半成品的Triton X-100残留量高于100ng/ml，而采用本发明的方法去除裂解剂，半成品的TritonX-100残留量均小于100ng/ml，最低达0。

3、HA回收率高。由于该发明的方法对HA无反应，因而去除裂解剂后HA的回收率可达95％以上。

4、成本低。采用该发明的方法只需使用少量价格低廉的磷酸盐，节省了其它方法均需购买大量离心机、层析柱、超滤器等的大量费用。

具体实施方式

下面结合实施例对本发明作进一步说明：

本发明所述的这种疫苗制备过程中裂解剂的去除方法，该方法步骤如下：在流感病毒裂解完成后向裂解液中按体积比1∶1.5-3加入1-1.5mol/L、pH7.2-7.5的磷酸盐缓冲液，等到出现白色絮状物时将样品装入离心杯中3000r/min离心20min，收集上清液，再经0.22μm-0.45μm滤膜过滤即可。

发明原理：高浓度的PB能与小分子Triton X-100、聚山梨酸酯80、脱氧胆酸钠等裂解剂发生特异性凝集反应而呈现白色絮状大分子，可以通过离心和过滤将其除去。而PB不与HA等抗原发生此反应。

除上述实施例外，本发明还可以有其他实施方式。凡采用等同替换或等效变换形成的技术方案，均落在本发明要求的保护范围。