[发明专利]抗乙型肝炎病毒X蛋白多肽药物

说明书

技术领域

本发明涉及多肽药物领域，具体涉及抗乙型肝炎病毒X蛋白的多肽和编码此多肽的多核苷酸，以及它们的应用。 

背景技术

肝癌是导致病人死亡的恶性肿瘤之一，其恶性程度高，在我国肝癌死亡率仅次于胃癌，居我国恶性肿瘤死亡率第二位。据统计，我国每年新增肝癌人数30万人，而每年肝癌死亡人数达11万。乙型肝炎病毒(hepatitis B virus，HBV)感染可导致肝炎、肝硬变和原发性肝癌的发生，在我国80％以上的肝癌患者为乙肝感染后肝癌，可称之为乙肝后肝癌。 

HBV为长约3.2Kb的DNA病毒，其开放阅读框表达乙型肝炎病毒表面抗原(HBsAg)、乙型肝炎病毒核心抗原(HBcAg)、乙型肝炎病毒多聚酶和乙型肝炎病毒X抗原(HBxAg)(或称之为乙型肝炎病毒X蛋白，即HBx)，其中HBx是HBV DNA复制所必须的因子。由于HBx是HBV DNA复制所必须的因子，因此抑制HBx的功能，意味着可抑制HBV的感染，以及由此导致的肝炎和肝硬变。 

另外，HBx作为反式作用因子，促进肝癌的生长和增殖，称之为癌蛋白。在分子水平、细胞水平和动物水平的研究也发现，HBx具有很强的促肝癌细胞增殖和迁移的作用。转基因鼠实验也证明HBx具有显著的促进肝癌发生的作用。大量研究结果显示，HBV感染的持续存在可导致慢性肝病，包括慢性肝炎、慢性肝炎反复发作引起的肝组织中纤维结缔组织增生后发生的肝硬变，及大部分在肝硬变基础上发生的肝癌。在慢性肝病(包括肝炎、肝硬变和肝癌)的发生发展过程中， HBx发挥了重要的作用。因此，HBx是预防和治疗肝病的重要靶点。 

目前，肝癌的治疗以手术为主，辅以介入疗法，而化疗效果不理想。在临床手术的肝癌组织中HBsAg和HBxAg的表达阳性检出率高达80％甚至90％以上。因此，HBx作为肝癌发生发展的重要致病因子，而发现其特异性抑制剂，则具有重要的理论意义和实际临床应用价值。然而，由于目前HBx的三维构象解析尚未完成，故难以通过HBx立体三维构象设计其化学抑制剂。 

多肽片段可作为药物，其在临床上已广为应用。例如，胸腺肽(thymopeptide)是从小牛胸腺中提取的胸腺五肽，具有促进淋巴细胞转化、增强巨噬细胞吞噬活性的作用，可用于治疗多种免疫缺陷病。多肽药物的特点是药理作用明确，安全性高，并易于生产。但是，多肽药物的发现难度大，其原因在于大部分的多肽片段在体内的半衰期短，直接影响药效学作用。 

发明内容

本发明涉及一种具有抑制乙型肝炎病毒X蛋白(hepatitis B virus X protein，HBx)功能活性的多肽，其在分子水平、细胞水平和动物水平上具有抑制HBx的活性，因而能抑制乙型肝炎病毒感染所造成的肝炎，由肝炎反复发作引起的肝硬变，以及在肝硬变基础上发生的肝癌。该多肽和它的肽模拟物，包括它们的功能片段和功能变体，以及编码这些多肽、肽模拟物或它们的功能片段、功能变体的基因，可广泛用于防治乙型肝炎感染后的肝病，包括肝炎、肝硬变和肝癌。 

一方面，本发明提供了分离的多肽或肽模拟物，其包含如SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列、或其功能片段或功能变体，所述多肽或肽模拟物具有抑制乙型肝炎病毒X蛋白的功能，并能抑制乙型肝炎病毒感染后的慢性肝病的发生和发展。所述乙肝病毒感染后的慢性肝病可以包括肝炎，由肝炎反复发作引起的肝硬变，以及在肝硬变基础上发生 的肝癌。 

在本发明的一些具体实施例中，上述多肽或肽模拟物，其包含的氨基酸序列、其功能片段或功能变体可以具有与SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列至少70％，或者80％，或者90％，以及甚至更高的相同性。优选地，这些多肽或肽模拟物包含如SEQ ID NOs：1-6中所示的任一种氨基酸序列。 

另一方面，本发明提供分离的多核苷酸，所述多核苷酸包含编码如SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列、其功能片段或功能变体的多核苷酸；或者是与包含编码如SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列、其功能片段或功能变体的多核苷酸互补或严格杂交的多核苷酸。优选地，这些多核苷酸为编码SEQ ID NOs：1-6所示的氨基酸序列的多核苷酸，或者为与编码SEQ ID NOs：1-6所示的氨基酸序列的多核苷酸互补或严格杂交的多核苷酸。