[发明专利]一种浓缩干燥肽段样品的方法

说明书

技术领域

本发明涉及蛋白质及多肽加工处理领域，特别是涉及一种浓缩干燥肽段样品的方法。

背景技术

随着人类基因组计划的实施和推进，生命科学研究已进入了后基因组时代。在这个时代，生命科学的主要研究对象是功能基因组学，包括结构基因组研究和蛋白质组研究等。尽管现在已有多个物种的基因组被测序，但在这些基因组中通常有一半以上基因的功能是未知的。目前功能基因组中所采用的策略，如基因芯片、基因表达序列分析等，都是从细胞中mRNA的角度来考虑的，其前提是细胞中mRNA的水平反映了蛋白质表达的水平。但事实并不完全如此，从DNA、mRNA到蛋白质，存在三个层次的调控，即转录水平调控，翻译水平调控，翻译后水平调控。从mRNA角度考虑，实际上仅包括了转录水平调控，并不能全面代表蛋白质表达水平。更重要的是，蛋白质复杂的翻译后修饰、蛋白质的亚细胞定位或迁移、蛋白质-蛋白质相互作用等则几乎无法从mRNA水平来判断。毋庸置疑，蛋白质是生理功能的执行者，是生命现象的直接体现者，对蛋白质结构和功能的研究将直接阐明生命在生理或病理条件下的变化机制。蛋白质本身的存在形式和活动规律，如翻译后修饰、蛋白质间相互作用以及蛋白质构象等问题，仍依赖于直接对蛋白质的研究来解决。虽然蛋白质的可变性和多样性等特殊性质导致了蛋白质研究技术远远比核酸技术要复杂和困难得多，但正是这些特性参与和影响着整个生命过程。

传统的对单个蛋白质进行研究的方式已无法满足后基因组时代的要求。要对生命的复杂活动有全面和深入的认识，必然要在整体、动态、网络的水平上对蛋白质进行研究。因此在上世纪90年代中期，国际上产生了一门新兴学科-蛋白质组学(Proteomics)，它是以细胞内全部蛋白质的存在及其活动方式为研究对象。可以说蛋白质组研究的开展不仅是生命科学研究进入后基因组时代的里程碑，也是后基因组时代生命科学研究的核心内容之一。

国际上蛋白质组研究进展十分迅速，不论基础理论还是技术方法，都在不断进步和完善。相当多种细胞的蛋白质组数据库已经建立，相应的国际互联网站也层出不穷。

蛋白质组学一经出现，就有两种研究策略。一种可称为“竭泽法”，即采用高通量的蛋白质组研究技术分析生物体内尽可能多乃至接近所有的蛋白质，这种观点从大规模、系统性的角度来看待蛋白质组学，也更符合蛋白质组学的本质。但是，由于蛋白质表达随空间和时间不断变化，要分析生物体内所有的蛋白质是一个难以实现的目标。另一种策略可称为“功能法”，即研究不同时期细胞蛋白质组成的变化，如蛋白质在不同环境下的差异表达，以发现有差异的蛋白质种类为主要目标。

就现有的蛋白质组研究技术，无论是哪种研究策略都需要将大分子的蛋白质酶解消化成肽段之后才能较好地应用质谱技术进行肽段信息分析，进而获得复杂的大分子蛋白质的信息。酶解消化后的肽段样品，经脱盐等处理后，其肽段浓度一般偏低，需要进一步浓缩干燥后重新定容定浓度才适合上质谱仪进行分析鉴定。目前肽段样品的浓缩干燥方法主要有真空冻干和常温真空抽干，两者共有的缺点是较大的时间成本，且真空冻干机价格昂贵，常温真空抽干在抽干过程中肽段样品容易被蛋白酶进一步降解，不利于准确信息的获取。

发明内容

本发明的目的是针对上述浓缩干燥方法中存在的时间长、成本高、肽段样品容易降解等问题，提供一种简便、快速、低成本、高效率的浓缩干燥肽段样品的方法。

为了实现上述目的，本发明采用了以下技术方案：

本发明公开了一种浓缩干燥肽段样品的方法，所述方法包括采用加热蒸干的方式使肽段样品溶液蒸发，且肽段样品溶液为中性溶液。

需要说明的是，本发明中，加热蒸干的温度不能太高或太低，加热温度过低所需加热时间长，温度过高容易沸腾，两种情况均可能会导致肽段分子的损失或破坏，因此，优选的，加热温度不超过90℃，为了减少蒸干所用的时间，更优选的加热温度为50～90℃，最优选为80～90℃。

本发明中，进一步的，所述方法包括如下步骤：

A.对蛋白质样品进行酶解消化，制备得到中性的肽段样品溶液，需要指出的是，样品溶液呈过酸或过碱状态均会使肽段容易发生降解，因此肽段样品溶液不能酸性或者碱性太高，优选的肽段样品溶液的pH值为pH6.5-7.5；

B.用加热蒸干的方式使肽段样品溶液蒸发。