[发明专利]玉米褪绿斑驳病毒单克隆抗体及其应用

说明书

技术领域

本发明涉及一种玉米褪绿斑驳病毒单克隆抗体及其应用。

背景技术

玉米褪绿斑驳病毒属是番茄丛矮病毒科下的一个属，该属只有玉米褪绿斑驳病毒一个种(Maize chlorotic mottle virus，NCBI登录号码为X14736)。玉米褪绿斑驳病毒的自然寄主是玉米，引起褪绿斑驳、坏死、矮化、穗发育差或无穗、过早死亡等症状。玉米褪绿斑驳病毒易通过机械接种传播，也可以经种子传播，在阿根廷、墨西哥、秘鲁、美国等地有报道。

玉米褪绿斑驳病毒的相对分子质量为6.1×10⁶，标准沉降常数S_20W＝109S，在氯化铯中的浮力密度为1.365g/cm³，病毒对乙醚、氯仿和非离子去垢剂不敏感，在体外可稳定33天以上，热钝化点在80-85℃，病毒在pH 6稳定，可由二价阳离子稳定。

玉米褪绿斑驳病毒的病毒粒子为等轴对称二十面体(T＝3)，用磷钨酸负染色直径约30nm，用醋酸铀负染色直径约33nm，无包膜，粒子外形呈六边形，有的被染色剂渗透，有180个蛋白结构亚基。玉米褪绿斑驳病毒的外壳蛋白由一种多肽组成(由近3’端的ORF4编码)，分子质量25.1kDa。玉米褪绿斑驳病毒的核酸为单分子线形正义ssRNA，长4437nt，核酸占病毒粒子重量的18％，有的病毒粒子还偶尔含有一个1100nt的亚基因组RNA。

发明内容

本发明的目的是提供一种玉米褪绿斑驳病毒单克隆抗体及其应用。

本发明提供的杂交瘤细胞株，命名为2C6，已于2011年02月22日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(简称CGMCC，地址为：北京市朝阳区北辰西路1号院3号)，菌种保藏号为CGMCC No.4579。分泌抗玉米褪绿斑驳病毒的单克隆抗体的杂交瘤细胞株2C6 CGMCC No.4579简称杂交瘤细胞株2C6。

本发明提供的单克隆抗体，是由杂交瘤细胞株2C6 CGMCC No.4579分泌产生的。

所述单克隆抗体可应用于如下(a)和/或(b)：

(a)制备辅助鉴定待测病毒是否为玉米褪绿斑驳病毒的试剂盒；

(b)制备辅助检测待测植物样本中是否含有玉米褪绿斑驳病毒的试剂盒。

本发明还保护包括所述单克隆抗体的试剂盒；所述试剂盒为如下(c)和/或(d)：

(c)辅助鉴定待测病毒是否为玉米褪绿斑驳病毒的试剂盒；

(d)辅助检测待测植物样本中是否含有玉米褪绿斑驳病毒的试剂盒。

所述试剂盒还可包括玉米褪绿斑驳病毒包被抗体(如购自购自Agdia公司，产品目录号为SRA17001的玉米褪绿斑驳病毒包被抗体)。

所述试剂盒还可包括酶标二抗(如购自中山金桥公司的碱性磷酸酯酶标记的马抗小鼠酶标抗体)。

所述单克隆抗体或所述试剂盒可用于辅助鉴定待测病毒是否为玉米褪绿斑驳病毒。所述待测病毒具体可为玉米褪绿斑驳病毒(Maize chlorotic mottle virus)、麝香石竹环斑病毒(Carnation ringspot virus)或番茄丛矮病毒(Toma to bushy stuntvirus)。

所述单克隆抗体或所述的试剂盒可用于辅助检测待测植物样本中是否含有玉米褪绿斑驳病毒。所述待测植物样本具体可为玉米(Zea mays L.)(如京科25)叶片、昆诺藜(Chenopodium guinoa)叶片或曼陀罗(Datura stramonium)叶片。

本发明提供了一种玉米褪绿斑驳病毒单克隆抗体及分泌该单克隆抗体的杂交瘤细胞株。本发明提供的单克隆抗体可作为玉米褪绿斑驳病毒的血清学诊断试剂，避免了交叉反应(特异性好)，大大提高了检测玉米褪绿斑驳病毒的灵敏度(效价高)。应用本发明提供的单克隆抗体鉴定待测病毒是否为玉米褪绿斑驳病毒，或检测待测植物样本中是否含有玉米褪绿斑驳病毒，具有简单、重复性好、一次可处理多个样品、特异性好、灵敏度高、应用广泛等优点。本发明提供的单克隆抗体可用于研制玉米褪绿斑驳病毒的免疫学诊断试剂，如酶联诊断试剂、胶体金免疫试纸条、抗体芯片、生物传感器等。本发明为玉米褪绿斑驳病毒的血清学诊断试剂的研制奠定了基础，将在玉米褪绿斑驳病毒的检测和鉴定中发挥重要作用。

具体实施方式