[发明专利]黑青斑河鲀干扰素IFNγ1及其制备方法和应用无效
| 申请号： | 201110064456.0 | 申请日： | 2011-03-17 |
| 公开（公告）号： | CN102180962A | 公开（公告）日： | 2011-09-14 |
| 发明（设计）人： | 卢丹琪;张旭;贝锦新;陈洁琳;易诗白;冷婷婷;林浩然 | 申请（专利权）人： | 中山大学 |
| 主分类号： | C07K14/57 | 分类号： | C07K14/57;C12N15/23;C12N15/10;C12N15/70;A61K39/39;A23K1/16 |
| 代理公司： | 广州粤高专利商标代理有限公司 44102 | 代理人： | 陈卫 |
| 地址： | 510275 广东*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 黑青斑河鲀 干扰素 ifn 及其 制备 方法 应用 | ||
1.一种黑青斑河鲀干扰素IFNγ1，其氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示。
2.权利要求1所述黑青斑河鲀干扰素IFNγ1的编码基因，其核苷酸序列如SEQ ID NO:2所示。
3.权利要求2所述黑青斑河鲀干扰素IFNγ1的编码基因的制备方法，其特征在于以黑青斑河鲀总mRNA为模板，以RNA Oligo dT，其序列如SEQ ID NO:3为引物，进行反转录，得到cDNA；再以cDNA为模板，设计上游引物SEQ ID NO:4，下游引物SEQ ID NO:5，进行PCR，得到权利要求2所述黑青斑河鲀干扰素IFNγ1的编码基因。
4.权利要求1所述黑青斑河鲀干扰素IFNγ1的制备方法，是将黑青斑河鲀干扰素IFNγ1的编码基因克隆至表达载体，得到重组表达质粒，转化至大肠杆菌，培养转化的大肠杆菌，经诱导后收集菌体，纯化、酶切，得到黑青斑河鲀干扰素IFNγ1。
5.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于所述表达载体为大肠杆菌表达载体pET32a，重组表达质粒的构建包括以下步骤：以含黑青斑河鲀干扰素IFNγ1编码基因的质粒为模板，设计上游引物SEQ ID NO:6，下游引物SEQ ID NO:7进行PCR，PCR产物克隆到pET32a上，得到重组表达质粒。
6.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于所述培养转化的大肠杆菌的培养条件为含氨苄青霉素LB液体培养基，30℃，250rpm振荡培养过夜，再接种到37℃预热的含氨苄青霉素 TB液体培养基中，培养至OD600达到0.6。
7.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于所述诱导为加入IPTG至终浓度为0.3mmol/L，诱导时间为7小时。
8.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于所述纯化是将总菌体用Bug Buster Master Mix混匀重悬，室温下孵育10-20min；4℃离心、沉淀用Bug Buster Master Mix重悬、4℃再离心，移去上清，沉淀即包涵体；将包涵体重悬于经1:10稀释的Bug Buster Master Mix 中，4℃离心，最终沉淀加盐酸胍裂解液洗涤，盐酸胍裂解液的pH7.8，含500mmol/L NaCl。
9.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于所述酶切是用rEK酶。
10.权利要求1所述黑青斑河鲀干扰素IFNγ1在制备鱼类免疫调节添加剂或鱼类免疫佐剂中的应用。
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