[发明专利]一种检测牛瓜氨酸血症有害基因的方法及其专用引物

说明书

技术领域

本发明涉及一种检测牛瓜氨酸血症有害基因的方法及其专用引物。

背景技术

随着人工授精和胚胎移植技术在奶牛育种中的应用，种质产品(个体、冻精、胚胎等)在世界范围内广泛流通，使得优秀公牛种质资源充分利用。但在获得优秀生产性能的同时，往往会将遗传疾病也进行扩散，尤其是常染色体隐性遗传疾病。

常染色体单基因隐性遗传病是由常染色体上的一对等位基因控制的，只有在该基因为隐性纯合的基因型时，个体才会患病。而隐性有害基因携带个体表型正常，但是其一旦与携带者交配，就会有0.25的可能性出现患病个体，而且携带者个体即使与正常个体交配，也会有0.5的可能性将有害基因传递给后代。这种特点导致它传播有害基因的几率非常大。一旦种用个体为常染色体有害基因的携带者，并且有良好的生产性能，在盲目追求提高生产性能的目的下，广泛利用其种用价值，就会导致有害基因的大面积扩散。

瓜氨酸血症(citrullinemia，CN)最早由Harper等在澳大利亚荷斯坦牛群中发现的一种常染色体单基因隐性遗传疾病。其分子遗传学基础是奶牛11号染色体(BTA11)上精氨酸合成酶(argininosuccinate synthetase，ASS)基因编码的第86个氨基酸密码子发生无义突变(CGA→TGA)，终止信号提前出现，从而使成隐性纯合个体ASS功能缺失(Dennis J A，Healy P J，Beaudet A L，et al.Molecular Definition of BovineArgininosuccinate Synthetase Deficiency.Proceedings of the National Academy of Sciences of the United Statesof America，1989，86：7947-7951.)。ASS参与肝脏的尿素循环，尿素循环受阻导致氨代谢障碍，使得血液中瓜氨酸浓度升高，个体产生氨中毒的现象。隐性纯合子犊牛一般在24小时内开始发病，出现精神沉郁、食欲下降、以头顶墙等逐渐加重的神经症状，最后死亡。病理学研究发现患病个体大脑皮层受到不同程度的损伤，犊牛从出生到发病再到死亡的全过程不超过一周(Harper P A W，Healy P J，Dennis J A.Animal Model of Human Disease-Citrullinemia(Argininosuccinate Synthetase Deficiency).American Journal of Pathology，1989，135：1213-1215；Healy P J，Harper P A W，Dennis J A.Bovine Citrullinaemia-A Clinical，Pathological，Biochemical and GeneticStudy.Australian Veterinary Journal l，1990，67：255-258.)。澳大利亚科学家通过系谱分析发现几乎所有CN患病犊牛都可以追溯到一个共同祖先-澳大利亚优秀种公牛Linmack CrissKing，其致病基因来自它的父亲Gray View Crisscross。Linmack Criss King公牛由于其女儿在乳脂率上的良好表现，其冻精在澳大利亚、新西兰等英联邦国家广泛使用，产生很多携带者后代(Healy PJ，Harper P A W，Dennis J A.Bovine Citrullinaemia-A Clinical，Pathological，Biochemical and Genetic Study.Australian Veterinary Journal l，1990，67：255-258；Healy P J，Dennis J A.，Camilleri L M，et al.Bovine Citrullinaemia Traced to the Sire of Linmack Kriss King.Australian VeterinaryJournal l，1991，68：155.)。

目前对CN的分子检测方法主要是PCR-RFLP，其主要内容是：1.围绕突变位点设计上下游引物，进行分析片段的扩增。2.利用限制性内切酶AvaII消化扩增片段。3.将消化好的片段进行琼脂糖电泳检测分型。如果原扩增片段不被AvaII消化成更小的片段，说明存在着有害基因。PCR-RFLP方法虽比较准确实用，但仍存在一定的假阳性，需要重复验证并结合系谱和测序结果进一步验证。

发明内容

本发明的目的在于提供一种引物组合物。