[发明专利]一种萝卜与芜菁属间远缘杂交获得离体胚的方法

说明书

技术领域

本发明为植物组织培养快速繁殖领域，具体涉及一种萝卜与芜菁属间远缘杂交获得离体胚的方法。

背景技术

萝卜(Raphanus sativus L.)是我国栽培的主要蔬菜作物之一，十字花科、萝卜属，一、二年生草本植物。原产我国，各地均有栽培，品种极多，常见有白皮萝卜、红皮萝卜、青皮萝卜等。根供食用，鲜食生食均可，种子含油42％，可用于制肥皂或作润滑油。种子、鲜根、叶均可入药，功能下气消积，生萝卜含淀粉酶，能助消化。大头菜(Brassica juncea Coss.var.napiformmis Palet.Bols)是芥菜的一个变种，为根用芥菜，是十字花科、芸薹属的二年生草本植物。其产品器官为肉质根，质地紧密，水份少，纤维多，形状为锥型，肉白色，肉质坚实，有强烈的芥辣味，具有宜肺豁痰、开胃理气的作用。芥菜含有丰富的维生素和大量的微量元素、糖类、蛋白质等，供食部分为肥大的肉质根。萝卜和大头菜均为根用蔬菜，但两者的风味不同。

芜菁是十字花科芸薹属的二年生草本植物，别名蔓菁等。其为直根系，下胚轴与主根上部膨大形成肉质根。芜菁喜冷凉气候，种子在2-3度时即可发芽，幼苗可耐2-3度的低温，成长的植株可耐轻霜，肉质根生长适温15-18℃，要求一定的昼夜温差。第一年主要为营养生长，形成产品器官。低温春化后，长日照和较高温度时抽薹时开花。对光照要求比较严格，光补偿点为4000勒克斯，光饱和点为2万勒克斯左右，肉质根生长期的光合强度为11.8mg二氧化碳·分。芜菁喜湿润的砂质壤土或壤土，在肉质根膨大盛期需适时灌水。有适应酸性土壤的能力。土壤pH值5.5时仍生长良好。芜菁需要较多的磷、钾肥，对增施有机肥有良好的反应。另外芜菁需要较多的磷、钾肥，对增施有机肥有良好的反应。另外芜青较耐土壤贫瘠，但肥料充足，比例适当，才能获得较高产量。

对于萝卜与芜菁的远缘杂交，特别在在杂种胚胎发育阶段出现胚胎败育时，实施胚胎抢救的最佳时期、最佳部位，培养条件等对胚胎抢救的影响国内外都没有系统研究。

发明内容

本发明提供一种萝卜与芜菁间远缘杂交获得离体胚的方法，明确了施胚胎抢救的最佳时期、最佳部位，培养条件等对胚胎抢救的影响，获得萝卜与芜菁间远缘杂交离体胚，获得杂种胚幼苗，以利于得到育种新资源。

本发明采用的技术方案是：

一种萝卜与芜菁间远缘杂交获得离体胚的方法，其特征在于按以下步骤依次组成：

(1)材料准备：以萝卜雄性不育为母本，以芜菁作为父本；

(2)播种：芜菁和萝卜种子播种在试验大棚里，对其进行常规田间管理；

(3)套袋、挂牌：萝卜和芜菁抽薹后套袋，萝卜雄性不育系每个单株单独套袋，挂牌编号标记，共10个单株，所有的数据取10个单株的平均值，大头菜不分单株，混合给萝卜授粉；

(4)授粉：套袋以后，萝卜与芜菁开花时，进行人工授粉；授粉一般在早上9点和下午3点进行，效果最佳；授粉的方法：1)在授粉之前首先用水将手洗干净，然后再用酒精消毒；2)打开纱网袋，摘下已经盛开的芜菁的花朵，摘完以后立即将纱袋封好；3)再打开萝卜植株的纱网袋，将芜菁的花粉授到萝卜的柱头上；

(5)胚胎抢救：

1)在试验田取授粉以后的荚果，取授粉后第4-10天的荚果，用小刀把果柄去掉；

2)用70％的乙醇消毒0.5min，然后用0.1％HgCl浸泡8～10min，无菌水冲洗3次，每次用无菌水浸泡3min；接种前，用无菌滤纸吸干荚表面无菌水，将其小心剥开获得杂种胚，在超净工作台上将杂种胚珠置入分化培养基；

3)当培养到长出真叶后将幼苗移至生根培养基上进行生根培养，培养室温度控制在25℃，光照16h.d^-1，光照强度2000lx，待季节恰当时将生根的幼苗移栽至营养钵中；

4)胚胎抢救期间，观察统计如下数据：测量荚长、荚的横径、统计结荚率和观察并统计杂种胚珠培养的出苗率，通过胚珠培养的结果确定萝卜与大头菜远缘杂交胚抢救的最佳时期。

在步骤(4)中为了增加花粉与柱头的亲和性，采用的是重复授粉法：连续授粉5天，并注意观察花粉与柱头的亲和性。

步骤(5)在杂种胚发育后5-7天期间进行胚抢救为最佳时期。

步骤(5)中培养基的配方为：分化培养基1/2MS+1.0mg/L 6-BA+0.2mg/L NAA+500mg/L水解酪蛋白+0.5％活性炭和生根培养基1/2MS+0.2mg/L 6-BA+1.0mg/L NAA。

本发明取得了以下有益效果：