[发明专利]一种微生物转化制备(S)-3-羟基-3-(2-噻吩基)-丙腈的方法

权利要求书

1.一种微生物转化制备(S)-3-羟基-3-(2-噻吩基)-丙腈的方法，其特征在于所述方法是以3-羰基-3-(2-噻吩基)-丙腈为底物，以酿酒酵母菌株CGMCCNo.2266发酵获得的发酵液再制得的固定化细胞颗粒为生物催化剂，进行转化反应制得(S)-3-羟基-3-(2-噻吩基)-丙腈。

2.如权利要求1所述的(S)-3-羟基-3-(2-噻吩基)-丙腈的制备方法，其特征在于所述的方法为：以3-羰基-3-(2-噻吩基)-丙腈为底物，以酿酒酵母菌株CGMCC No.2266发酵获得的发酵液再制得的固定化细胞颗粒为生物催化剂，以邻苯二甲酸二丁酯为溶剂组成生物转化体系，于20～40℃转化反应8～72小时，转化液经分离纯化得到产物(S)-3-羟基-3-(2-噻吩基)-丙腈。

3.如权利要求1所述的(S)-3-羟基-3-(2-噻吩基)-丙腈的制备方法，其特征在于所述3-羰基-3-(2-噻吩基)-丙腈的初始浓度为0.01～3mol/L。

4.如权利要求1所述的(S)-3-羟基-3-(2-噻吩基)-丙腈的制备方法，其特征在于所述的生物转化体系中每升邻苯二甲酸二丁酯含有的菌体干重相当于以包埋法将0.330L菌体浓度为3.0～10.0g/L的发酵液制成固定化细胞颗粒在发酵培养基中20～40℃增殖培养16～72小时后获得的增殖培养后的固定化细胞颗粒的菌体干重；所述发酵液中菌体浓度定义为：单位体积发酵液中所含有的菌体的干重。

5.如权利要求1所述的(S)-3-羟基-3-(2-噻吩基)-丙腈的制备方法，其特征在于所述的生物催化剂按以下方法制备：将经酿酒酵母菌株CGMCC No.2266发酵培养获得的发酵液与等体积质量浓度1～5％的海藻酸钠水溶液混合，搅拌均匀，得到含有菌体的海藻酸钠混合液，将含有菌体的海藻酸钠混合液逐滴滴入质量浓度为2.5～4.0％的氯化钙水溶液中，连续搅拌，获得固定化悬浮液，将悬浮液于35～38℃下固化，获得固定化细胞颗粒，所述的固定化细胞颗粒用无菌生理盐水洗涤后分散于发酵培养基中20～40℃增殖培养16～72h，过滤，获得增殖培养后的固定化细胞颗粒，以增殖培养后的固定化细胞颗粒为生物催化剂，所述的发酵液中菌体浓度为2.0～25.0g/L。

6.如权利要求5所述的(S)-3-羟基-3-(2-噻吩基)-丙腈的制备方法，其特征在于所述的固定化细胞颗粒的直径为1～5mm。

7.如权利要求5所述的(S)-3-羟基-3-(2-噻吩基)-丙腈的制备方法，其特征在于所述的生物催化剂具体按照如下方法获得：将发酵液与等体积2％的海藻酸钠水溶液相混合，所述的发酵液菌体浓度为4.3g/L，搅拌均匀得到含有菌体的海藻酸钠混合液，将含有菌体的海藻酸钠混合液逐滴滴入质量浓度为3.5％的氯化钙水溶液中，连续搅拌，含有菌体的海藻酸钠混合液固化形成凝胶珠固定化颗粒，将得到的固定化悬浮液在37℃条件下固化，获得固定化细胞颗粒，所述的固定化细胞颗粒用无菌生理盐水洗涤后分散于发酵培养基中30℃进行增殖培养24h，过滤，获得增殖培养后的固定化细胞颗粒，以增殖培养后的固定化细胞颗粒作为生物催化剂。

8.如权利要求1所述的(S)-3-羟基-3-(2-噻吩基)-丙腈的制备方法，其特征在于所述的分离纯化方法为：反应结束后，将转化液过滤除去固定化细胞颗粒，将滤液旋转蒸发除去溶剂邻苯二甲酸二丁酯得到混合物，将混合物采用硅胶柱层析分离，硅胶型号100目，柱床高径比10∶1，先采用体积比为80∶20石油醚和丙酮的混合液洗脱至无杂质峰出现弃去洗脱液，再用70∶30石油醚和丙酮的混合液洗脱至无目标产物吸收峰出现为止，收集洗脱液，干燥，即可获得产物(S)-3-羟基-3-(2-噻吩基)-丙腈，用体积比60∶40的石油醚和丙酮的混合液洗脱硅胶层析柱回收利用。