[发明专利]鉴定水稻暗胚乳突变基因Wx-mq不同基因型的四引物标记方法

权利要求书

1.一种鉴定水稻暗胚乳突变基因Wx-mq不同基因型的四引物PCR分子标记方法，其特征在于：

用Wx-mq基因特异性引物

正向外引物Wx-mq-O-F序列为 5'-ATGTTGTGTTCTTGTGTTCTTTGCAGGC-3'

反向外引物Wx-mq-O-R序列为 5'-GTAGATCTTCTCACCGGTCTTTCCCCAA-3'

正向内引物Wx-mq-I-F序列为 5'-GGGTGAGGTTTTTCCATTGCTACAATCG-3'

反向内引物Wx-mq-I-R序列为 5'-GTCGATGAACACACGGTCGACTCAAT-3'

扩增水稻品种的基因组DNA，如果同时有439 bp和292 bp两条特征条带，则为暗胚乳突变基因Wx-mq的纯合体；如果同时有439 bp和200 bp两条特征条带，则为不含暗胚乳突变基因Wx-mq的纯合体；如果同时存在439 bp、292 bp和200 bp的三条特征条带，则说明该植株是暗胚乳突变基因Wx-mq的杂合体。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：

（1）水稻植株基因组DNA的提取；

（2）将权利要求1所述的四条分子标记引物Wx-mq-O-F、Wx-mq-O-R、Wx-mq-I-F和Wx-mq-I-R加入同一PCR反应体系，并对水稻种质资源或育种群体植株的DNA进行扩增；20 μL PCR反应体系包括：10 ng/μL的 DNA 2.0 μL，4 pmol/ μL的引物2.0 μL ，其中引物Wx-mq-O-F、Wx-mq-O-R、Wx-mq-I-F和Wx-mq-I-R各0.5 μL，含25 mmol/L MgCl₂的10×PCR Buffer 2.0 μL，2.5 mmol/L的dNTP 0.4 μL，5 U/μL 的Taq0.5 μL和ddH₂O 13.1 μL；

PCR反应程序包括：95 ℃预变性5 min；然后95℃变性30s、65℃复性30s、72℃延伸1min，循环35次；然后72℃延伸7min，10℃冷却10min后，将扩增产物加上样缓冲液终止反应；

（3）反应产物在质量比浓度为1.5%的琼脂糖凝胶上电泳，经溴化乙锭染色并于凝胶成像系统下观察，记载。