[发明专利]人猴通用2型糖尿病检测引物组、PCR芯片及检测方法

说明书

技术领域

本发明涉及用于分析人类和食蟹猴2型糖尿病相关基因表达状态的PCR引物组、荧光定量PCR检测芯片及检测方法。

背景技术

2型糖尿病（简称T2DM）是糖尿病的一种,又称非胰岛素依赖型糖尿病，其并发症（如糖尿病酮症酸中毒、糖尿病非酮症性高渗综合征、乳酸性酸中毒、高血压、糖尿病足、眼部病变、肾脏病变、神经病变等）发病率以及致残、致死率高；以前曾认为糖尿病是一种中老年性疾病，而近年发现随着儿童及青少年肥胖病的增多，糖尿病发病呈年轻化趋势。

近年来,随着人民生活水平的提高,糖尿病的发病率正逐年升高,糖尿病已成为继心脑血管疾病、肿瘤之后的第三个严重危害人类健康的非传染性疾病，糖尿病的防治已成为科学工作者的一个重要课题。T2DM是由遗传因素和环境因素共同作用引起，属于多基因疾病。T2DM患者的病情一般比较缓和，如果对糖尿病不能早期诊断并给以恰当的防治，可能出现各种慢性并发症。研究资料表明，在未出现表型症状之前，某些相关基因的表达状态就已在疾病的发生发展中产生了显著变化，因此，通过糖尿病PCR芯片分析糖尿病发病进程各个阶段基因的表达变化，阐明相关基因在糖尿病发生、发展中的表达规律对研究糖尿病的发病机理是非常必要的，同时也利于对糖尿病早发现、早防治。

在糖尿病的研究中，糖尿病实验猴模型尤其是糖尿病食蟹猴模型是重要的研究人类T2DM发生、发展以及治疗的模型，应用广泛。市场上已有的糖尿病PCR芯片主要是对人类、大鼠和小鼠，尚无食蟹猴的PCR芯片，研制食蟹猴模型的糖尿病PCR芯片，对于促进糖尿病的基础研究、预防检测和临床治疗具有重要意义。目前还未见能同时分析人类和食蟹猴T2DM相关基因表达状态的荧光定量PCR芯片，主要困难在于未能获得在同样条件下扩增并用于分析人类和食蟹猴T2DM相关基因表达情况的引物组。

发明内容

为了克服现有技术的上述不足，本发明一方面提供了能够在同样条件下扩增并用于分析人类和食蟹猴T2DM相关基因表达情况的引物组，另一方面还提供了包含有上述引物组的荧光定量PCR检测芯片；同时本发明还提供了上述引物组进行T2DM基因表达情况进行检测的方法。

本发明通过比对人和食蟹猴T2DM疾病相关的蛋白基因在GeneBank中公布的序列，针对共有的特异性序列分别设计引物，通过筛选最终获得本发明的能够在同样条件下扩增，且相互之间扩增效率相近的，能够用于分析人类和食蟹猴T2DM相关基因表达状态的引物组。

所述与人和食蟹猴T2DM疾病相关蛋白包括与糖尿病代谢相关的蛋白：

所述相关蛋白还包括与受体和信号通路相关的蛋白：

所述相关蛋白还包括与分泌因子相关的蛋白：

所述相关蛋白还包括与信号转导相关的蛋白：

所述相关蛋白还包括与转录因子相关的蛋白。

本发明的目的之一在于提供一种人猴通用T2DM相关基因检测引物组，包括分别用于扩增与T2DM相关的基因ACE、ACLY、G6PD、GSK3B、HMOX1、IDE、PRKCB1、PYGL、AQP、CCR2B、CEACAM1、CTLA4、GCGR、ICAM1、NSF、RAB4A、SELL、SNAP23B、STX4、STXBP2、TNFRSF1A、VAMP3、VAPA、IFNG、INS、TGFB1、TNFA、IGFBP5、INPPL1、PIK3C2B、PIK3R1、IKBA、NEUROD1、NFKB1、PPARGC1A、AGT的扩增引物对，上述基因扩增引物对序列分别为SEQ ID NO：1-72所示的核苷酸序列。

各基因的扩增引物对对应的核苷酸序列如表1所示。

优选的，所述的人猴通用T2DM检测引物组，还包括分别用于扩增GAPDH、YWHAZ、ACTB、B2M、RPL13A基因的扩增引物对中的至少两对，所述GAPDH基因的扩增引物对序列分别为SEQ ID NO：73-74所示的核苷酸序列；所述YWHAZ基因的扩增引物对序列分别为SEQ ID NO：75-76所示的核苷酸序列；所述ACTB基因的扩增引物对序列分别为SEQ ID NO：77-78所示的核苷酸序列；所述B2M基因的扩增引物对序列分别为SEQ ID NO：79-80所示的核苷酸序列；所述RPL13A基因的扩增引物对序列分别为SEQ ID NO：81-82所示的核苷酸序列。GAPDH、YWHAZ、ACTB、B2M、RPL13A基因均为管家基因。

优选的，还包括用于检测PCR效率的扩增引物对，该扩增引物对序列能够扩增在人和食蟹猴中均表达的管家基因的特异性序列。