[发明专利]ANGPTL4作为缺氧检测的标志物及其应用

说明书

技术领域

本发明涉及肿瘤学和检测领域。更具体地，本发明涉及一种可用于缺氧检测的血清标记物ANGPTL4及其应用。

背景技术

ANGPTL4基因(最初该基因被发明人的实验室命名为pp1158)[朱洪新等，中华肿瘤杂志(2002)24(2)：123-125]就是利用此功能筛选技术平台从人胎盘cDNA文库中克隆到的新基因，该基因cDNA全长为1943bp，开放阅读框含1218bp，编码406个氨基酸，预计分子量为45.2kDa。N端有一疏水信号肽和卷曲(Coiled-Coil)结构域，C端有一纤维蛋白原样(Fibrinogen-like)结构域。并于2000年首先将该基因(原基因名为pp1158)的cDNA序列在GenBank上登录(登录号为AF202636)。现已同Yoon等克隆的PGAR[Mol.Cell.Biol.，Jul 2000；20：5343-5349]和Kim等克隆的HFARP[Biochem.J，2000，346：603-610]由HUGO统一正式命名为ANGPTL4(angiopoietin-like 4)。

ANGPTL4在肿瘤转移中的作用越来越引起人们的关注。目前的研究表明ANGPTL4对肿瘤转移的影响是非常复杂的，在不同的肿瘤中有不同的作用：对Lewis肺癌细胞和黑色素瘤细胞B16F0的研究表明ANGPTL4能够通过对血管和肿瘤细胞的双重影响，即改变血管的渗透及肿瘤细胞的运动和侵润能力，来抑制肿瘤细胞的转移。与此相反，在乳腺癌的最新研究表明，TGFβ1在乳腺癌中诱导ANGPTL4的上调，乳腺癌细胞分泌的ANGPTL4能够破坏内皮细胞之间的连接，增加肺毛细管的渗透性，促进肿瘤细胞的跨血管内皮细胞的迁移，与TGFβ1共同启动了乳腺癌的肺转移。

另外，超过一半的晚期原位实体瘤存在局部缺氧，并分散在肿瘤的不同区域。造成肿瘤缺氧的原因主要是正常血管输送的氧气不能满足肿瘤快速生长的需要。为了减轻缺氧，肿瘤细胞会释放促进血管新生的分子，新生血管往往使血管网紊乱，有大量的血管盲端、扭曲血管以及动静脉间短路，易于肿瘤细胞穿透而形成远处转移。同时缺氧细胞基因组非常不稳定，具有更强的侵润性和转移能力。因此缺氧对肿瘤的进展包括肿瘤发生和转移过程中起着非常重要的作用。

据报道对缺氧或者说缺氧信号最为敏感的转录因子是HIF。其中HIF-1α与多种恶性肿瘤的发生、发展、转移及预后等多种生物学行为相关。HIF-1α是一个螺旋-环-螺旋的转录因子，普遍存在于哺乳动物细胞中；在常氧条件下，HIF-1α的脯氨酰和天冬酰胺酰残基被羟化，然后与VHL蛋白结合，发生降解，因此其半衰期非常短；而在缺氧条件下，HIF-1α不被降解，入核与HIF1β结合形成异源二聚体，发挥转录因子的功能。HIF-1α有可以调控很多与血管新生、细胞增殖、肿瘤转移、肿瘤细胞的侵润和糖代谢等有关的基因。

缺氧与肿瘤进展尤其是转移密切相关密切相关，肿瘤是否处于缺氧状态的判断一般是根据肿瘤组织的形态学以及缺氧诱导因子表达的改变，这需要肿瘤病人手术后得到肿瘤组织才能进行检测。从科学研究实验角度看，HIF-1α蛋白在常氧下半衰期非常短，检测不方便。

综上所述，本领域尚缺乏令人满意的检测缺氧状态的方法，更缺乏血清检测缺氧的方法。因此，本领域迫切需要开发可用于检测(尤其是血清检测)缺氧(状态)的标志物和方法。

发明内容

本发明的目的就是提供一种可用于检测(尤其是血清检测)缺氧(状态)的标志物及其应用。

在本发明的第一方面，提供一种血管生成素样蛋白4(ANGPTL4蛋白)或其特异性抗体的用途，它们用于制备缺氧检测的诊断试剂或试剂盒。

在另一优选例中，所述的ANGPTL4蛋白或其特异性抗体偶联有或带有可检测标记。

在另一优选例中，所述可检测标记选自下组：生色团、化学发光基团、荧光团、同位素或酶。

在另一优选例中，所述诊断试剂是单克隆抗体。

在另一优选例中，所述的特异性抗体是单克隆抗体。

在另一优选例中，所述的缺氧检测是血清检测。

在另一优选例中，所述的血清检测是ELISA法、或双抗夹心时间分辨免疫荧光法(TRFIA法)。

在本发明的第二方面，提供了一种用于缺氧检测的诊断试剂盒，所述的试剂盒含有：

(a)一容器，所述容器中含有ANGPTL4蛋白或其特异性抗体；以及

(b)标签或说明书，所述标签或说明书注明所述试剂盒用于缺氧检测；

或者所述的试剂盒含有：