[发明专利]用于检测人类EGFR基因19号外显子突变的引物组合物、试剂盒及方法无效
| 申请号： | 201110069107.8 | 申请日： | 2011-03-22 |
| 公开（公告）号： | CN102181536A | 公开（公告）日： | 2011-09-14 |
| 发明（设计）人： | 倪剑锋;戚琳玲;徐辉;杨文辉;潘承斌 | 申请（专利权）人： | 宁波基内生物技术有限公司 |
| 主分类号： | C12Q1/68 | 分类号： | C12Q1/68;C12N15/11 |
| 代理公司： | 杭州杭诚专利事务所有限公司 33109 | 代理人： | 尉伟敏 |
| 地址： | 315201 浙江省宁*** | 国省代码： | 浙江;33 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 用于 检测 人类 egfr 基因 19 号外 突变 引物 组合 试剂盒 方法 | ||
1. 一种用于检测人类EGFR基因19号外显子突变的引物组合物，其特征在于其是由具有如下所述的核苷酸序列的引物组成：
5’-TAACGTCTTCCTTCTCTCTCTGTCA-3’ SEQ ID No:1,
5’-GAAAGTTAAAATTCCCGTCGCTA-3’ SEQ ID No:2,和
5’-ACACAGCAAAGCAGAAACTCACA-3’ SEQ ID No:3。
2.一种试剂盒，其特征在于至少包括如权利要求1所述的引物组合物和PCR反应液。
3. 根据权利要求2所述的试剂盒，其特征在于所述的PCR反应液包括以下组分：pH 8.4的Tris-HCl 40 mM，MgCl2 15～24 mM，KCl 50 mM，(NH4)2SO4 10 mM，dNTP 0.5mM，终浓度0.06～0.10 U/μL 的Taq DNA聚合酶；所述的引物组合物包括：各10μM的SEQ ID No:1和SEQ ID No:2所示的引物，以及20μM的SEQ ID No:3所示的引物。
4. 一种权利要求2或3所述的试剂盒在检测非小细胞肺癌药物疗效相关的EGFR基因19号基因外显子突变中的应用。
5.一种检测人类EGFR基因19号基因外显子突变的方法，其特征在于包括以下步骤：
（1）待测样本处理和模板DNA提取；
（2）使用权利要求2或3所述的试剂盒对步骤（1）得到的DNA进行半巢式PCR扩增；
（3）检测步骤（2）所得到的PCR扩增产物。
6.根据权利要求6所述的方法，其特征在于：步骤（1）中的样本为手术切除的新鲜病理组织、石蜡包埋病例组织、全血、血浆、血清或胸腔积液。
7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于：步骤（3）中的检测方法为微流体芯片检测法。
8.根据权利要求5-7中任一项所述的方法，其特征在于包括以下步骤：
（1）用权利要求1所述的引物组合物对被测样本的DNA进行半巢式PCR扩增，纯野生型、纯突变型和杂合突变型的扩增产物不同；
（2）扩增产物通过微流体芯片进行检测；
（3）通过对各检测峰的数量及检测峰位置的判断，确定检测到的片段数量及大小，从而确定被检测的基因，判断临床样本EGFR基因19号外显子的突变情况；
（4）结果判断：a）仅出现149bp和98bp两个PCR扩增产物，说明临床样本的EGFR基因19号外显子未出现突变情况，为纯野生型；b）出现149bp和98bp两个PCR扩增产物，以及其他两个条带，说明临床样本的EGFR基因19号外显子发生部分突变。
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