[发明专利]家蚕反应器高效表达三叶半夏凝集素

权利要求书

1.一种三叶半夏凝集素(Pinellia ternata agglutinin，PTA)基因，其与NCBI报道的PTA基因序列(AY451854.1)比对显示第24、25、47、56、59、67、69、72、85、90、104、108、115、127、129、133、148、149、151、177、298、241、255、264、267、273、280、281、287、288、308、311、316、325、326、327、331、348、381、412、415、416、427、433、437、441、463、470、474、475、483、485、490、504、508、511、547、550、552、562、586、598、606、634、638、648、703、706、714、741、742、744、750、766、771、772、773、774等78位所对应的碱基具有显著差异。

2.权利要求1的基因，其核酸序列为SEQ ID NO：1所示的序列。

3.一种蛋白质，其由权利要求1或2所述的基因序列编码。

4.一种重组载体，其包含权利要求1或2所述的基因核酸序列。

5.权利要求4所述的重组载体，其是基于pEasy T1、pFastBac^TMHTA、pFastBac^TMHTB、pFastBac^TMHTC或pFastBac^TM1构建的。

6.一种家蚕宿主细胞，其可以在适合的表达条件下表达权利要求1或2所述的基因核酸序列。

7.权利要求6所述的家蚕宿主细胞，其是取自家蚕(菁松×皓月品系)的卵母细胞BmN。

8.一种重组家蚕杆状病毒，其是通过将权利要求4或5的重组载体转化到含病毒DNA的感受态细胞中通过定点转座获得重组Bacmid DNA，由脂质体介导转染家蚕卵母细胞，待出现明显的病毒感染症状后，取上清回收而获得的。

9.权利要求8所述的重组家蚕杆状病毒，所述含病毒DNA的感受态细胞是大肠杆菌DH10 Bac。

10.权利要求8所述的重组家蚕杆状病毒，所述家蚕卵母细胞是BmN细胞。

11.权利要求8所述的重组家蚕杆状病毒，其在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心保藏，保藏号为CGMCC No：3677。

12.权利要求1或2所述的基因序列，权利要求3所述的蛋白质，权利要求4或5所述的重组载体，权利要求6或7所述的家蚕宿主细胞，权利要求8-11所述的重组家蚕杆状病毒用于制备抗肿瘤药物的应用。 

13.权利要求12的应用，其中所述肿瘤为肝癌。

14.权利要求13的应用，其中所述肝癌细胞为Bel-7402。

15.一种家蚕反应器杆状病毒表达系统，其中将权利要求8-11的重组家蚕杆状病毒转染家蚕卵母细胞扩增病毒并提高其滴度，然后将扩增后的重组家蚕杆状病毒接种至蚕幼虫和蚕蛹体内进行三叶半夏凝集素的表达，回收家蚕淋巴血及蛹体，分离纯化并冻干保存。

16.根据权利要求15所述的家蚕反应器杆状病毒表达系统，其中所述家蚕卵母细胞为家蚕BmN细胞。

17.根据权利要求15所述的家蚕反应器杆状病毒表达系统，其中所述的含有三叶半夏凝集素基因的重组家蚕杆状病毒是Bm-Bac-pta，其构建是通过将重组转移载体pFastBac^TMHTA-pta转化到含病毒DNA的大肠杆菌DH10Bac中通过定点转座获得重组Bacmid DNA，由脂质体介导转染家蚕卵母细胞，待出现明显的病毒感染症状后，取上清回收获得重组家蚕杆状病毒进行的。

18.一种利用权利要求15-17中任一项的家蚕反应器杆状病毒表达系统表达三叶半夏凝集素基因并将所述表达产物用于制备抗肿瘤的蛋白类药物的方法。