[发明专利]PDK3基因及其表达产物的应用

说明书

技术领域

本发明涉及基因治疗技术领域，特别是涉及一种PDK3基因及其表达产物的应用。

背景技术

肝癌的治疗在过去20年里取得了很大的进展，出现了一些局部非手术治疗方案。例如，经导管动脉内化疗栓塞(TACE)，是中晚期肝癌治疗的重要手段，可使90％以上的肝癌患者受益；经皮肝穿刺瘤内无水乙醇治疗(PEI)，也是常用的局部化疗方法，对癌直径小于3厘米的肝癌及门静脉癌栓有一定疗效。但是，由于目前肝癌的化疗药物基本沿用其他肿瘤的治疗药物，针对性较差，因此，总体疗效不佳，迫切需要寻找新的作用靶点，研究和开发肝癌特异的新药物，以提高化疗的特异性和有效性。

蛋白激酶是由人类基因组中最大的一类基因所编码的，其作用是通过将磷酸基团转移至底物蛋白上，来调控各种蛋白的活性、信号转导通路及细胞生物学过程。目前已知的原癌基因中，大约有55％编码蛋白激酶，其余的多数编码可激活蛋白质激酶或被激酶磷酸化的特异蛋白。制药公司已认识到了蛋白激酶抑制剂的重要性，正在积极研发新的蛋白激酶抑制剂，用于治疗包括肿瘤在内的各种疾病。

丙酮酸盐脱氢酶(PDH)复合物是一种细胞核内编码的线粒体多酶复合物，催化丙酮酸盐完全转化为acetyl-CoA and CO(2)，它提供了糖酵解与三羧酸循环之间的关键联系，因此也是负责调控葡萄糖代谢的主要酶之一。PDH的酶活性受到磷酸化/去磷酸化的调控，磷酸化导致PDH的失活。PDK3(丙酮酸脱氢酶激酶，同工酶3)基因编码的蛋白是三种丙酮酸盐脱氢酶激酶之一，通过E1 alpha亚基的磷酸化抑制PDH复合物。

发明内容

本发明要解决的技术问题之一是提供一种PDK3基因及其表达产物在制备治疗肝癌的药物中的应用。

本发明要解决的技术问题之二是提供三对PDK3基因的siRNAs，用于制备治疗肝癌的药物。

为解决上述技术问题，本发明通过如下技术方案实现：

在本发明的一个方面，提供了一种PDK3基因及其表达产物在制备治疗肝癌的药物中的应用。

所述治疗肝癌的药物包括：通过RNA干扰抑制PDK3基因表达的双链核糖核酸(包括该双链核糖核酸的不同修饰状态及不同递送方式)、DNA载体、腺病毒或腺相关病毒载体；能够特异性抑制PDK3基因激酶活性的化合物、多肽或单克隆抗体。

在本发明的另一方面，提供了三对用于制备治疗肝癌药物的PDK3基因的siRNAs，其中，第一对siRNA的正义链具有如SEQ ID NO：1所示的序列，反义链具有如SEQ ID NO：2所示的序列；第二对siRNA的正义链具有如SEQ ID NO：3所示的序列，反义链具有如SEQ ID NO：4所示的序列；第三对siRNA的正义链具有如SEQ ID NO：5所示的序列，反义链具有如SEQ ID NO：6所示的序列。

本发明实验证实，通过PDK3基因序列特异性siRNA干扰可以显著抑制肝癌细胞的生长，因此，PDK3基因可作为肝癌治疗药物的靶基因，为肝癌的防治提供新的途径。

附图说明

图1是实施例1的RNAi筛选步骤示意图；

图2是实施例1的RNAi筛选数据处理过程图；

图3是实施例1中，激酶siRNAs库对四株肝癌细胞Hep3B、Huh-7、MHCC-97H、MHCC-97L生长活性影响分布图；

图4是实施例1中，通过对四株肝癌细胞Hep3B、Huh-7、MHCC-97H、MHCC-97L分别确定5％可信区间和10％分析区间，获得抑制、促进细胞生长的siRNAs及对应的激酶基因的结果图；

图5是实施例1中四株肝癌细胞Hep3B、Huh-7、MHCC-97H、MHCC-97L全激酶组范围内RNAi对细胞活性影响的统计图；

图6是实施例1的RNAi筛选体系鉴定干扰PDK3基因能够抑制肝癌细胞Hep3B、Huh-7、MHCC-97H的生长示意图。

具体实施方式

下面结合附图和实施例，对本发明作进一步详细的说明。

以下实施例仅用于说明本发明，而不用于限制本发明的范围。实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件，例如Sambrook等人，分子克隆：实验室手册(New York：Cold Spring Harbor Laboratory Press，1989)中所述的条件，或按照制造厂商所建议的条件。

实施例1全激酶组范围内RNAi筛选肝癌细胞生长必需激酶基因