[发明专利]TRIM28基因及其表达产物的应用

说明书

技术领域

本发明涉及一种基因的应用，特别是涉及一种TRIM28基因及其表达产物的应用。

背景技术

蛋白激酶是由人类基因组中最大的一类基因所编码，其作用是通过将磷酸基团转移至底物蛋白上，来调控各种蛋白的活性、信号转导通路及细胞生物学过程，人类基因组编码超过57个激酶家族之中的518种蛋白激酶，大约有55％已知的原癌基因编码蛋白激酶，其余多数的原癌基因则编码可激活蛋白质激酶或被激酶磷酸化的特异蛋白。所有蛋白激酶参与细胞信号通路，参与心血管疾病、糖尿病、感染性疾病、关节炎和其它免疫紊乱、神经系统如老年性痴呆症，阿默海茨症AD等发病机制，现已发现与超过400种人类疾病与蛋白激酶相关。美国FDA的制药和生物技术公司中有四分之一的药物研究开发方案集中在研发新的蛋白激酶抑制剂，这些药物应用于治疗包括肿瘤、炎症、心力衰竭、糖尿病和神经系统疾病，超过60种的蛋白激酶抑制剂正在临床试验之中，其中许多已开发上市，如诺华(Novartis)的阿利斯康(AstraZeneca)的施贵宝的(Genentech and OSI Pharmaceuticals)，拜尔的(Bayer)，辉瑞的(Pfzer)，(Bristol-Myers Squibb)，和葛兰素史克的(GlaxoSmithKline)]，制药公司清楚地认识到蛋白激酶抑制剂的重要性，已成为药物研发的热点。肝癌严重威胁着我国人民的生命健康。肝癌的诊断，尤其早期诊断是临床诊疗和预后的关键。

肝癌的治疗在过去20年来已取得很大的进展，外科手术切除及肝脏移植属于“根治性”治疗，仍是肝癌治疗的首要选择。随着肝癌早期诊断水平的提高及肿瘤治疗生物学概念的改变，肿瘤局部非手术治疗在肝癌治疗中的地位日益提高。经导管动脉内化疗栓塞(TACE)已成为不能切除肝癌治疗的首选方法，是中晚期肝癌治疗的重要手段。该方法可使90％以上的肝癌患者受益，但总体疗效有待提高。此外，经皮肝穿刺瘤内无水乙醇治疗(PEI)也是较常用的局部化疗方法，对癌直径＜3cm的肝癌及门静脉癌栓的治疗有一定价值。但目前肝癌的化疗药物基本沿用其他肿瘤的治疗药物，针对性差，疗效不佳，因此，迫切需要寻找新的作用靶点，研究和开发肝癌特异的新药物，提高化疗的特异性和有效性。近几年来随着对肝癌基础研究的深入，生物治疗在肝癌的综合治疗中取得了较大进展，成了继手术、放疗、化疗后肿瘤治疗的第四大疗法，如免疫治疗、基因治疗，包括抗血管生成、自杀基因治疗、肿瘤疫苗治疗、siRNA技术等。但许多生物治疗的临床疗效仍不十分满意，且绝大多数还处在实验研究阶段，相关的关键理论和实验技术仍需进一步研究和发展。

TRIM28基因编码的蛋白通过与许多转录因子中都存在的Kruppel相关box抑制结构域相互作用而发挥转录调控功能。该蛋白定位于核，结合特定的染色质区域。本发明中首次公开了干扰TRIM28基因能够抑制肝癌细胞的生长，提示TRIM28基因是一种新型的制备肝癌治疗药物的靶点。

发明内容

本发明要解决的技术问题之一是提供一种TRIM28基因及其表达产物在制备治疗肝癌的药物中的应用。

本发明要解决的技术问题之二是提供三对TRIM28基因的siRNA，该三对siRNA可用于制备治疗肝癌的药物。

为了解决上述技术问题，本发明通过如下技术方案实现：

在本发明的一方面，提供了一种TRIM28基因在制备治疗肝癌的药物中的应用。

所述治疗肝癌的药物包括：通过RNA干扰抑制TRIM28基因表达的双链核糖核酸、DNA载体、腺病毒或腺相关病毒载体、能够抑制TRIM28蛋白激酶活性的化合物、多肽、单克隆抗体。

为了实现本发明中TRIM28基因作为制备肝癌治疗药物的靶点，本发明通过如下技术方案实现：

1、化学合成双链核糖核酸分子，其序列特异性针对TRIM28基因序列，利用脂质体包裹递送至肝癌细胞内，干扰TRIM28基因的表达，CCK-8法测量肝癌细胞Huh-7，Hep3B，MHCC-97H，MHCC-97L生长活性。本发明中实验结果证明特异性针对TRIM28基因的小核糖核酸分子能够抑制肝癌细胞体外的生长，说明TRIM28基因可用作制备肝癌治疗药物的靶基因。

本发明中用于特异性干扰TRIM28基因的小核糖核酸序列设计原则如下：