[发明专利]辅助鉴定锁阳属植物的方法及其专用引物

说明书

技术领域

本发明涉及生物技术领域中辅助鉴定锁阳属植物的方法及其专用引物。

背景技术

锁阳为锁阳科(Cynomoriaceae)锁阳属(Cynomorium L.)植物锁阳(Cynomoriumsongaricum Rupr.)的肉质茎，植物锁阳又名乌兰高腰、不老药、金不换，为多年生全寄生草本植物，专一寄生于蒺藜科(Zygophyllaceae)白刺属(Nitraria L.)植物的根上，锁阳主产于内蒙古、新疆、甘肃、青海、宁夏等地的半荒漠或荒漠地带，是重要的中药和蒙药植物。

锁阳性温、味甘，《本草纲目》中记载：锁阳，大补阴气，益精血，利大便，润燥养筋，治痿弱。现代医学研究表明，锁阳中富含挥发性物质、鞣质类化合物、酚类化合物、三萜类化合物、微量元素和氨基酸等，具有提高免疫功能、清除自由基、抗氧化、防突变、抗癌等活性。锁阳中的熊果酸、熊果酸丙二酸半脂、乙酰熊果酸和缩合鞣质具有很强的抑制艾滋病毒蛋白酶的作用。由于锁阳的特殊药用价值，自古以来被广泛用于临床治疗。

锁阳药材来源于民间采挖，随着锁阳应用价值的提升，滥采乱挖现象愈发严重，野生锁阳资源日益减少。因此，市场上也出现了利用列当混淆使用，也有利用锁阳冒充肉苁蓉、草苁蓉的情况发生。

鉴于锁阳药材资源紧缺以及市场上存在伪品等问题，而传统的形态鉴别要求有一定的经验，对于破碎后的药材就更加难以准确鉴别。因此需要快速、准确鉴别药材真伪的方法。目前对人参、黄芪、管花肉苁蓉等重要药材的分子生物学鉴别方法已有报道，但尚未见到锁阳分子生物学鉴定方法的报道。

发明内容

本发明的一个目的是提供一种用于鉴定锁阳属植物的引物对。

本发明所提供的用于鉴定锁阳属植物的引物对，由序列表中序列1所示的引物和序列表中序列2所示的引物组成。

本发明的另一个目的是提供一种辅助鉴定锁阳属植物的方法。

本发明所提供的辅助鉴定锁阳属植物的方法，包括以下步骤：

以待鉴定植物的基因组DNA为模板，用权利要求1所述的引物对进行PCR扩增，得到PCR扩增产物；测序检测所述PCR扩增产物，若所述PCR扩增产物为1064bp的片段，则确定所述待鉴定植物候选为锁阳属植物。

以待鉴定植物的基因组DNA为模板，用权利要求1所述的引物对进行PCR扩增，得到PCR扩增产物；琼脂糖凝胶电泳检测所述PCR扩增产物，若所述PCR扩增产物在凝胶上显示为1000bp-1100bp的条带，则确定所述待鉴定植物候选为锁阳属植物。

所述琼脂糖凝胶电泳是采用1.5％琼脂糖凝胶电泳，在电压为5v/cm下进行。

所述PCR扩增的反应条件为：94℃预变性5分钟；然后按照下列参数进行循环反应：94℃变性45秒，58℃～62℃或58℃或60℃或62℃复性40秒，72℃延伸70秒；循环30次；循环反应结束后在72℃保持7分钟。

所述锁阳属植物为锁阳。

所述引物对在辅助鉴定锁阳属植物中的应用也属于本发明的保护范围。

所述锁阳属植物为锁阳。

本发明设计了可以鉴别锁阳的一对高效特异性引物，该引物在给定的反应条件下，能够特异性地鉴别锁阳，对于伪品锁阳不能扩增出相应的DNA片段。本专利所使用的方法直接分析生物基因型而非表现型，所以鉴定结果不受环境因素、样品形态和材料来源的影响。该方法不仅可以弥补中药材的形态鉴别中的主观因素，同时具有用量少、效率高、稳定性高、准确可靠的特点，对于规范锁阳的药材使用有着重要的意义。

附图说明

图1为实施例1中方法Ⅰ的PCR反应产物电泳检测结果。

图2为实施例1中方法Ⅱ的PCR反应产物电泳检测结果。

图3为实施例1中方法Ⅲ的PCR反应产物电泳检测结果。

具体实施方式

下述实施例中所使用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法。

下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。

采用北京百泰克生物技术有限公司的新型快速植物基因组DNA提取试剂盒(离心柱型)提取肉苁蓉、锁阳、黄花列当、草苁蓉等植物中提取总DNA，利用PCR方法扩增多个基因片段，得到的基因片段纯化后测序，根据锁阳与肉苁蓉、草苁蓉、黄花列当等列当科植物基因片段序列差异较大的区域及锁阳属植物特有的基因序列，设计出一对鉴别性的PCR引物：

引物1：ggagatgggattgcacatgt(序列表中序列1)，

引物2：ccgcagacttgtttcattac(序列表中序列2)。