[发明专利]为真核表达的目的构建原核基因表达岛

权利要求书

1.构建用于原核固氮基因真核表达的表达岛的方法，包括：

测定一组原核固氮基因中每一个的天然启动子的强度，

依据所测定的强度，将所述启动子替换为以下T7启动子或其变体，

其中所述表达岛为包含以下T7启动子或变体与以下固氮基因特定组合的表达岛：T7wt+nifJ，T7wt+nifHDKY，T7M5+nifENX，T7M5+nifUSVM，T7M6+nifF，和T7M6+nifBQ，并且其中所述原核固氮基因以天然操纵子的形式存在，其中所述T7M5是指在T7启动子的第-2位由T变为G获得的启动子变体，T7M6是指在T7启动子的第-4位由T变为G获得的启动子变体。

2.权利要求1的方法所构建的表达岛，其中所述操纵子以BioBrick组件的形式组合。

3.权利要求2的表达岛，其中的各个操纵子还带有彼此不同的限制酶位点。

4.质粒，含权利要求2-3之一的表达岛。

5.权利要求4的质粒，是多拷贝质粒。

6.表达系统，含权利要求4或5的质粒，还含有携带T7RNA聚合酶基因的质粒。

7.细胞，含权利要求2-3之一的表达岛，或权利要求4或5的质粒，或权利要求6的表达系统。

8.T7启动子或其变体用于协调多个原核固氮基因表达的用途，其中所述T7启动子或其变体为T7wt、T7M5、T7M6，所述多个原核固氮基因包括nifF，nifJ，nifHDKY，nifENX，nifBQ和nifUSVM，其中所述T7启动子或变体与固氮基因按以下特定组合构建表达岛来协调固氮基因的表达：T7wt+nifJ，T7wt+nifHDKY，T7M5+nifENX，T7M5+nifUSVM，T7M6+nifF，和T7M6+nifBQ，其中所述T7M5是指在T7启动子的第-2位由T变为G获得的启动子变体，T7M6是指在T7启动子的第-4位由T变为G获得的启动子变体。