[发明专利]为了测定糖化胺的样品前处理方法和糖化胺的测定方法

说明书

本申请是申请日为2002年10月9日、优先权日为2001年10月11日、中国专利申请号为02820191.4、发明名称为“为了测定糖化胺的样品前处理方法和糖化胺的测定方法”的分案申请。

技术领域

本发明涉及为了测定糖化胺的样品前处理方法和糖化胺的测定方法。

背景技术

以往，利用氧化还原反应测定样品中的测定对象的量已广泛实施，其也适用于生化分析、临床检查等中糖化胺(糖化蛋白质、糖化肽、糖化氨基酸等)的测定。

特别地，血液中的糖化蛋白质，特别是其中的红细胞中的糖化血红蛋白反映机体血糖值的过去的历史，因此是糖尿病诊断、治疗等中的重要指标。例如，如下所示，用前述氧化还原反应，测定这种红细胞中的糖化蛋白质。

首先，将红细胞溶血以制备样品，将果糖基氨基酸氧化酶(以下称为“FAOD”)加到此溶血样品中，其作用于糖化蛋白质的糖化部分，从而通过氧化还原反应生成过氧化氢。此过氧化氢量对应于前述糖化蛋白质量。然后，将过氧化物酶(以下称为“POD”)和通过氧化而显色的还原剂加到此样品中，从而以前述POD为催化剂在前述过氧化氢和前述还原剂之间发生氧化还原反应。通过前述反应使前述还原剂显色，通过测定这种显色而可以测定前述过氧化氢量，结果是，可以得知红细胞中的糖化蛋白质量。

发明内容

但是，用这种氧化还原反应测定糖化蛋白质的方法有这样的问题，例如，生成比对应于样品中实际所含糖化蛋白质的过氧化氢更多的过氧化氢。而且，取决于患者，糖化蛋白质的测定值暂时急剧升高，从而无法进行可信的测定。因此，前述方法需要进一步提高测定精度。而且，不限于在用前述氧化还原反应的测定方法，例如，在用抗原抗体反应的糖化胺测定方法中也同样需要提高测定精度。

因此，本发明的目的是提供用于测定糖化胺的样品前处理方法，借此使糖化胺的高度可信的测定成为可能。

为了达成前述目的，本发明提供以糖化胺为测定对象的样品的前处理方法，所述方法包括使FAOD作用于前述样品中存在的除测定对象糖化胺以外的糖化氨基酸或糖化肽而分解之，以除去前述糖化氨基酸或糖化肽。

前述“FAOD”是一般名称，其底物不限于糖化氨基酸，例如，其还作用于糖化肽。而且，在本发明中，“糖化肽”指FAOD起作用的长度的肽，例如，氨基酸残基数在2-6范围内的肽。因此，在本发明中，FAOD不起作用的长度的糖化肽和糖化蛋白质总称为“糖化蛋白质”。这样，作为测定对象的前述糖化胺，例如，包括糖化蛋白质、糖化肽和糖化氨基酸。

本发明的发明人进行了深入研究以提高测定精度，并最终发现以下的事实。即，在全血中，除本来存在测定对象糖化胺以外，还存在测定对象以外的游离糖化氨基酸和糖化肽，前述FAOD也对这种糖化氨基酸和糖化肽起作用。因此，如果如上述用FAOD进行糖化胺的测定，则不仅在测定对象糖化胺和FAOD之间发生氧化还原反应，而且在测定对象以外的糖化氨基酸、糖化肽和FAOD之间发生氧化还原反应，从而在表面上增加测定对象的测定值。而且，关于前述问题，即就同一患者的全血样品而言，即使在完全相同的条件下通过前述测定方法进行测定，从患者采血时间不同时测定值也显著变化，还发现了以下事实。即，这个问题是主要见于接受点滴等的患者的现象，作为点滴成分，例如，含有葡萄糖等糖类和各种氨基酸时，由这些外来成分形成糖化氨基酸，糖化氨基酸暂时增加，导致上述测定值变化。这种现象不仅存在于前述通过氧化还原反应的测定中，例如，在前述用抗原抗体反应的测定方法中也同样出现。因此，本发明的发明人发现，即使全血样品中存在正常的糖化氨基酸或糖化肽、暂时的外来糖化氨基酸或糖化肽等除测定对象以外的糖化物，如果如本发明那样预先对样品进行前处理，使分解用FAOD作用于除测定对象以外的糖化氨基酸、糖化肽，就可以抑制如前述的表面上的测定值升高。通过其可以提高测定精度，此外，例如，由于与是否接受点滴无关，采血可以在任何时间进行，因此可以减少患者的负担。因此，这样的样品前处理方法，例如，如果应用于前述的糖化血红蛋白的测定，则糖化血红蛋白作为糖尿病诊断指标的可靠性得以提高，从而成为临床医疗等领域中的有用方法。

其次，本发明提供通过使FAOD作用于样品中的糖化胺，测定其氧化还原反应而测定糖化胺的量的方法，所述方法包括在前述氧化还原反应之前，预先用前述本发明的前处理方法处理前述样品而分解前述样品中存在的除糖化胺以外的糖化氨基酸或糖化肽，以除去前述糖化氨基酸或糖化肽。