[发明专利]一种药敏试剂盒的制备方法以及药敏检测方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种用于水产养殖的药敏试剂盒以及药敏检测方法，具体的说是一种用于淡水养殖或海水养殖时检测病体或水样的药敏试剂盒的制备方法以及药敏检测方法。

背景技术

由于养殖密度过大、环境恶化和其它多种原因，导致近年来水产养殖细菌性疾病频发，造成巨大的经济损失。由于养殖者科学知识的缺乏和市场经济利益的驱使，滥用渔药特别是抗生素的现象普遍存在，导致水产致病菌的耐药性、水产品药残、环境污染及生态破坏等问题日益加剧。要从源头上解决抗生素滥用问题，关键是在治疗前进行药敏试验，从而在正确诊断的基础上对症下药。国际上常用的药敏试验方法是K-B纸片法。采用这种方法进行药敏试验要求将致病菌分离纯化，需要花一周左右的时间，而且必须在专业的微生物实验室条件下，由具备专业知识的人员完成，因此不适合在广大养殖者中推广。中国专利局于2007年2月28日公开的，授权公告号为“CN2874498Y”的“药敏检测盒”，它用于动物疫病诊断检测，包括带检测孔1的检测盒2上盖有检测盒盖3，在检测盒2底面上刻有测量刻度4。它通过各种药物，直接按照试验目的加入检测孔中即可进行药敏试验。这种检测盒由于病毒、细菌没有培养，所获取的病毒、细菌有限，根本无法进行有效的检测。

发明内容

本发明的目的在于针对上述现有技术的缺陷和不足，为人们提供一种操作简便，价格适中，适用于水产基层作为防治淡水细菌性疾病的选药工作的药敏试剂盒的制备方法以及使用该药敏试剂盒进行药敏检测的方法。

为实现上述目的本发明所采取的技术方案是：一种药敏试剂盒的制备方法，所述的药敏试盒包括装有增菌培养液的离心管、装有固体培养基的的培养皿以及药敏贮药圈。

装有增菌培养液的离心管的制备：

a、将重量配比为5-15份的蛋白胨、3-8份的酵母提取物、5-15份的氯化纳倒入已装有600-1000份蒸馏水的烧杯中，搅拌均匀；

b、往烧杯中倒入盐酸或氢氧化纳，将烧杯中的溶液PH值调整到7.3±0.1，配制成增菌培养液；

c、将烧杯中的溶液倒入可调式分液器，通过可调式分液器将增菌培养液注入离心管内，将盖子旋上但不旋紧，留半圈至一圈；

d、将装有增菌培养液的离心管放在试管架上，再放入自动高压灭菌锅内，高压灭菌10-20分钟；

e、灭菌结束后将离心管取出，然后旋紧离心管的管盖，放入真包装袋内抽真空。

装有固体培养基的的培养皿的制备：

a、将重量配比为5-15份的蛋白胨、3-8份的酵母提取物、5-15份的氯化纳、10-15份的琼脂倒入已装有600-1000份蒸馏水的三角烧瓶中，搅拌均匀；

b、往三角烧瓶中倒入盐酸或氢氧化纳，将烧杯中的溶液PH值调整到7.3±0.1，制成培养液；

c、将三角烧瓶放入自动高压灭菌锅内，高压灭菌10-20分钟；

d、在超净台内对自动分液器的储液漏斗消毒，然后将冷却到55-65度的培养液倒入自动分液器的储液漏斗内，分装到培养皿中；

e、将培养皿平放于超净台上，并打到超净台紫外灯，使培养液冷却凝固成固体培养基；

f、将培养皿的盖子盖上，然后装入真空包装袋抽成真空。

药敏贮药圈的制备：

制作15-20种药物的药敏纸片，将药敏纸片粘贴于贮药圈的正面，然后装入真空包装袋抽成真空。

在装有增菌培养液的离心管的制备的步骤b中加入海水晶或者浓缩海水后，调整盐度到24-28之间，pH6.8-7.2之间，配制成增菌培养液；在装有固体培养基的的培养皿的制备的步骤b中加入海水晶或者浓缩海水后，调整盐度到24-28之间，pH6.8-7.2之间，配制成培养液。

一种根据使用药敏试剂盒进行药敏检测方法，其特征在于

a、准备：将手、剪刀和解剖容器清洗干净，并用75％医用酒精、水煮或火烧等形式对剪刀和解剖容器进行消毒；

b、取样：选病症典型的濒死鱼虾等个体，清水洗净解剖部位；用剪刀解剖，观察病变，再次消毒剪刀后，剪取约黄豆大小的典型病灶直接放入装有增菌培养液的离心管，并旋紧离心管管盖，若检测水样，则直接取5-10滴水样滴入装有增菌培养液的离心管内，并旋紧离心管管盖；

c、液体培养：用力振荡离心管数次后放置，且应避免阳光直射，之后每隔半个小时至1个小时用力振荡离心管数次，直到液体混浊；

d、涂布：将离心管内液体倒入装有固体培养基的培养皿中心部位，应避免倒入离心管底的沉淀物，然后用涂布棒轻轻地在固体培养基上将液体涂抹均匀，并应避免将固体培养基表面划破；