[发明专利]热缩组合式微通道芯片、制备及应用方法

权利要求书

1.热缩组合式微通道芯片的制备方法，其特征在于：

由以下步骤实现：

步骤一：将带有U型槽的玻璃基质置于体积浓度为6.5%酸溶液中，70℃水浴超声清洗1小时；再置于质量浓度为10%的碱溶液中，80℃水浴超声清洗1小时；超纯水清洗后，真空干燥30分钟；

步骤二：对玻璃基质的U型槽内壁进行氨基化处理和醛基化处理；

步骤三：体积为0.1μL、摩尔浓度为10μmol/L生物素标记的核酸探针溶液经毛细作用吸入内径为250μm玻璃点样管内，加至玻璃基质的U型槽内壁，室温避光静置24小时，在质量浓度为0.1%的十二烷基硫酸钠溶液中超声清洗5分钟，超纯水清洗3次，真空干燥30分钟，4℃保存；

步骤四：将内径为3.0 mm，热缩比为2：1的铁氟龙透明高聚物热缩材料套管置于体积浓度为6.5%的酸溶液中，超声清洗30分钟；再置于质量浓度为10%的碱溶液中，超声清洗30分钟，超纯水清洗；100μL无水乙醇来回穿梭冲洗30分钟，超纯水清洗；真空冷冻干燥，洁净工作区保存，室温保存；

步骤五：将U型槽内固定有核酸探针的玻璃基质放置于清洗后的热缩材料套管中，80℃真空干燥箱内均匀受热5分钟，热缩后套管高度透明，与玻璃基质的U型槽结合紧密。

2.根据权利要求1所述的热缩组合式微通道芯片的制备方法，其特征在于：步骤一中的酸溶液为硝酸溶液，碱溶液为氢氧化钠溶液。

3.根据权利要求1所述的热缩组合式微通道芯片的制备方法，其特征在于：

步骤二中的氨基化处理由以下步骤实现：经步聚一处理后的带有U型槽的玻璃基质浸泡于体积比为1：9的3-氨基丙基三甲氧基硅烷/甲苯溶液中，置于80℃水浴超声30分钟，重复4次，1000转/分钟水平式离心5分钟；依次用分析纯甲苯溶液、体积浓度为95%的乙醇溶液超声10分钟；

步骤二中的醛基化处理由以下步骤实现：将经过氨基化处理过的带有U型槽的玻璃基质置于体积浓度为10%的戊二醛磷酸缓冲液中，室温放置24小时，纯净水内超声清洗5分钟，真空干燥。

4.根据权利要求1所述的热缩组合式微通道芯片的制备方法，其特征在于：步骤四中的酸溶液为硝酸溶液，碱溶液为氢氧化钠溶液。

5.如权利要求1所述的制备方法得到的热缩组合式微通道芯片。

6.热缩组合式微通道芯片的应用方法，其特征在于：

由以下步骤实现：

步骤一：芯片腔道内吸入15μL的预杂交液，热缩组合式微通道芯片垂直固定于杂交仪内旋转杆上，在42℃、40转/分钟的条件下，预杂交液在微通道芯片腔道内穿梭20分钟，10ml超纯水以30ml/min流速冲洗微通道芯片腔道，1000转/分钟水平式离心3分钟；

步骤二：脱氧核苷酸序列靶分子与杂交溶液按1：4体积比混合得到杂交反应液，杂交仪内，42℃、15μL杂交反应液、40转/分钟的条件下，在微通道芯片腔道内穿梭30分钟；

步骤三：55℃条件下，将5.0ml洗脱液1以10ml/min流速冲洗微通道芯片腔道，然后将10ml洗脱液2以10ml/min流速冲洗微通道芯片腔道；

步骤四：芯片腔道内吸满由pH为7.0的磷酸盐缓冲液经1500倍稀释后的亲和链霉素-碱性磷酸酶，于37℃下避光放置20分钟，再由10ml、pH为7.0的磷酸盐缓冲液以10ml/min流速冲洗芯片腔道；

步骤五：将25μL显色液加入微通道芯片腔道，37℃下避光放置20分钟；

步骤六：观察实验结果并拍照记录。

7.根据权利要求6所述的热缩组合式微通道芯片的应用方法，其特征在于：所述的步骤一中的预杂交液成份为100ug/ml鲑鱼精、质量浓度为0.1%的十二烷基硫酸钠溶液、质量浓度为0.1%的牛血清白蛋白和5×柠檬酸钠缓冲液。

8.根据权利要求6所述的热缩组合式微通道芯片的应用方法，其特征在于：所述的步骤二中的杂交溶液的成份为体积浓度为50%的去离子甲酰胺、5×柠檬酸钠缓冲液和质量浓度为0.1%的十二烷基硫酸钠溶液。