[发明专利]枯草芽孢杆菌在拮抗幽门螺杆菌中的应用

说明书

技术领域

本发明涉及一种枯草芽孢杆菌的应用，尤其涉及一种枯草芽孢杆菌在拮抗幽门螺杆菌中的应用。

背景技术

。1983年Marshall和Warren等首次成功分离得到幽门螺杆菌，许多研究都证实它是引起慢性胃炎和十二指肠溃疡的主要病因，是导致胃癌发生的潜在因素。

目前，普遍采用国际标准三联疗法（standard triple therapy）对幽门螺杆菌感染进行治疗。即将铋、甲硝唑与四环素或氨苄青霉素联用，幽门螺杆菌根除率为50-90％。该疗法副作用大，同时可能导致幽门螺杆菌耐药株的产生，从而进一步增加治疗难度。另外，幽门螺杆菌在抗生素和体内不利因素的诱导下可形成细胞壁缺陷的L型，这也是临床上幽门螺杆菌感染治愈后易复发的主要因素之一。近年来，人们在研究替代抗生素治疗幽门螺杆菌感染方面做了大量的工作，发现多种拮抗幽门螺杆菌生长的方法，尤其是通过益生菌来预防和治疗幽门螺杆菌所引起的感染，更是目前研究的热点。

益生菌通过黏附、竞争、排斥、占位及产生抑制物等机制，抑制胃肠道内的致病菌，保持原籍菌群的优势，从而促进人体和动物体的健康。目前，国外对拮抗幽门螺杆菌的益生菌的研究主要集中在乳酸菌方面，多种乳杆菌分泌的乳酸及多种蛋白混合物都具有拮抗幽门螺杆菌的作用。动物实验证明，乳酸菌活菌制剂能有效防止幽门螺杆菌感染，并显著减轻动物体内幽门螺杆菌感染引发的炎症，降低幽门螺杆菌在胃内的定植密度。

枯草芽孢杆菌是一类好氧性革兰氏阳性细菌, 其所需营养简单，可以产生多种抗菌物质，抑制多种致病菌的生长。抗菌物质中大部分是多肽，主要抑制革兰氏阳性菌；有些多肽还能抑制革兰氏阴性菌、霉菌和酵母。其中有一些高分子量蛋白类的抗菌物质和低分子量的抗菌肽已被应用于治疗人类、动物和植物的疾病，同时也可作为生物表面活性剂、食品防腐剂、饲料添加剂和分子生物学的研究工具。

由于芽孢杆菌其能产生耐热抗逆的芽孢,而这一功能对菌剂的生产、剂型加工及其在环境中的存活、定殖与繁殖都十分有利，因此国内出现了多种微生态制剂，如 “整肠生”、“促菌生”“白天鹅”等。目前国内外在开展枯草芽孢杆菌预防和治疗幽门螺杆菌感染方面还未见报道。

发明内容

本发明的目的在于提供了一种枯草芽孢杆菌在拮抗幽门螺杆菌中的应用，该枯草芽孢杆菌菌株具有较强的抑制幽门螺杆菌生长能力，使用安全、无残留、不产生抗药性。

本发明是这样来实现的，一种枯草芽孢杆菌在拮抗幽门螺杆菌中的应用，枯草芽孢杆菌在营养肉汤液体培养基中37℃、180 rpm摇床培养9小时，可产生抑制幽门螺杆菌生长的物质，有效抑制幽门螺杆菌生长；18小时抑菌能力达到最大，经纯化获得抑菌蛋白，制成治疗胃肠道疾病的制剂。

将枯草芽孢杆菌在营养肉汤液体培养基中37℃、180 rpm摇床培养12-16小时，过滤菌体并制成拮抗幽门螺杆菌的活菌口服制剂。

本发明应用如下：

1、枯草芽孢杆菌上清液的抑菌作用

采用打孔扩散法对33株益生菌（包括芽孢杆菌、肠球菌，乳杆菌和双歧杆菌）发酵上清液及菌体破碎液进行体外拮抗幽门螺杆菌实验（见表1）。发现一株枯草芽孢杆菌的上清液对幽门螺杆菌具有显著抑制作用。通过对三株不同来源的幽门螺杆菌菌株（菌株编号分别为：NCTC11637、SS1、SS2000）抑制效果的比较发现，枯草芽孢杆菌对NCTC11637具有最强的抑制作用，抑菌圈直径达到22±0.4 mm，对另两株则分别达到15±0.23 mm和18±0.24 mm。进一步研究发现，此枯草芽孢杆菌对对单核增生李斯特菌、金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌也具有拮抗作用。

表1为益生菌细胞组分对幽门螺杆菌的抑制结果。                                               

注：T为典型菌株

２、利用枯草芽孢杆菌培养物制备功能性成分的方法：

发明人通过酸分级沉淀初步获得抑菌粗蛋白，去除了部分杂蛋白。将该粗蛋白通过阴离子交换层析进一步纯化，收集各洗脱峰的液体进行抑菌活性鉴定，在非变性凝胶电泳的辅助下，纯化获得单一的抑制幽门螺杆菌的蛋白，最终制成干粉或通过压片等方式做成功能性成分产品。

３、制备活菌制剂的方法：