[发明专利]季也蒙毕赤酵母510-6jm在石油烃类污染物处理中的应用

说明书

技术领域

本发明涉及微生物技术领域，具体地说是涉及一种新分离的季也蒙毕赤酵母(Pichia guilliermondii sp.)510-6jm，可利用它在石油烃类污染物降解功能，用于在污染修复和工业清洗中的使用。 

背景技术

生物修复是一类低耗、高效和环境安全的生物技术，主要依靠细菌、真菌甚至高等植物以及细胞游离酶的自然代谢过程降解，去出环境中的污染物。迄今为止，已知能降解石油烃类的微生物共有100余属，200多种，他们分属于细菌、放线菌、霉菌和藻类。降解石油的细菌有假单胞菌属，季也蒙毕赤酵母属、小球菌属、弧菌属等属中的某些菌株。其中最为常见的为假单胞菌属，已发现其含有多种降解烃类的质粒，并曾用于基因工程中，对乙烷、丙烷、丁烷等短链烷烃或长链烷烃与芳烃的降解。常见的降解是有的霉菌有曲霉、青霉、支孢霉等属中的菌株，白腐真菌对石油等有机物的降解效率很高。酵母菌中常以假丝酵母分解石油而产生的酵母蛋白质。近年来又发现蓝细菌与绿藻可降解芳烃，尤其是蓝藻似乎具有氧化多种芳烃的能力。 

目前全世界各国有近8万艘远洋商船穿梭于全球各港口，它们在航行期间向海洋排放的油污每年可达百万吨以上。另外，海上溢油事故近年来在各地也频繁发生，海洋油污染已严重威胁到海洋生态环境的安全。 

海洋溢油将经历溶解、挥发、光化学氧化分解、吸附与沉降以及生物降解等一系列过程。其中，生物降解是彻底消除油污的最重要途径，而利用微生物降解作用来主动清除溢油的生物修复技术是当今一种非常重要的环境生物技术。其中，季也蒙毕赤酵母是海洋中重要的石 油降解优势菌之一。本发明将为石油烃类污染生物修复提供重要的菌种。 

发明内容

本发明提供了一种能够用于石油烃类污染生物修复的新的微生物-季也蒙毕赤酵母。其命名为季也蒙毕赤酵母Pichia guilliermondii sp.510-6jm，2010年7月10日保藏于中国典型培养物保藏中心(CCTCC)，地址：中国武汉武汉大学，其保藏登记号为CCTCC NO：M2010173。本发明所述的季也蒙毕赤酵母分离自表层海水样品，该样品采集自印度洋。 

本发明所述的微生物为0.8-1.5μm长、0.6-1.2μm宽，不生鞭毛，不产芽孢。在NaCl浓度为3％的LB琼脂培养基上28℃培养3天能够形成特征性的菌落形态：微小、乳白色、半透明、中央突起、表面湿润、边缘带有不规则且透明的晕环。能够利用以下碳源：吐温40、吐温80、单甲基琥珀酸、琥珀酸、γ-氨基丁酸、甘露糖、蜜二糖。能够利用碳链长度12C～36C的直链烷烃，在16C～32C中生长迅速。 

表1为本发明所述季也蒙毕赤酵母生理生化特征。 

本发明所述柴油季也蒙毕赤酵母与现存的同属其它种相比具有以下特征： 

表1 生理生化特征 

SEQ ID No.1为本发明所述季也蒙毕赤酵母的26S rDNA序列D1/D2区，SEQ ID No.2为本发明所述季也蒙毕赤酵母的ITS序列。 

附图说明

图1本发明所述柴油季也蒙毕赤酵母的透射电子显微镜照片。 

实施例

实施例 

季也蒙毕赤酵母510-6jm的分离

从印度洋采集表层海水样品，在实验室中按下列条件培养即可获得本发明所述的季也蒙毕赤酵母510-6jm。 

人工海水培养基：NaCl＝24g/L；MgSO₄·7H₂O＝7.0g/L；NH₄NO₃＝1g/L；KCl＝0.7g/L；KH₂PO₄＝2.0g/L；Na₂HPO₄＝3.0g/L，pH7.4，灭菌后补加适量微量元素混合液，并补以柴油作为唯一碳源。柴油及微量元素经0.22μM滤膜过滤除菌。将样品接种于柴油含量1％(v/v)的100mL人工海水培养集中。28℃、200r/min摇床培养4～5天后，从培养液中取出1mL转 入100mL新鲜培养基中。如此富集6次后，将最终的富集物梯度稀释、涂布平板，28℃培养48小时后分离、纯化单菌落。 

季也蒙毕赤酵母510-6jm清除油污染水体