[发明专利]土茯苓组培苗的培养方法

说明书

明涉及通过组织培养技术培养植物种苗的方法，具体是一种土茯苓组培苗的培养方苓为百合科植物光叶菝葜(Smilax glabra Roxb.)的干燥根茎，为常绿攀援状灌木，于我国西南部、南部至东南部各省区，亚洲东南部各国也有分布。其性平味甘淡，其野生根状茎为原料，具有清热除湿，解毒，利关节、健脾胃等多种功能，可以治旋体、关节酸痛、尿路感染、白带、疮疡等多种疾病。土茯苓的开发前景十分广阔，于需求量加大，人们对野生土茯苓资源的掠夺式采挖，其生态环境被严重破坏，导茯苓资源急剧下降，大力发展人工栽培，具有重要的生态和经济意义。

，国内外学者开展了对土茯苓的初步研究，包括化学成分，药理活性，人工种植等有关土茯苓的生物技术方法的研究较少，组织培养的研究主要集中在组织诱导、基件筛选和理化因子的考查等方面。

还没有找到一个切实有效地培养技术用以解决土茯苓诱导、增殖生根培养中存在的点，从而影响了土茯苓的深入研究和应用。因此，研究土茯苓的人工培养技术，实显得十分重要。

明的目的在于克服现有技术中的不足，提供一种繁殖速度快的土茯苓组培苗的培养

现上述目的本发明提供一种土茯苓组培苗的培养方法，该方法包括如下步骤：

植物外植体的选择及无菌处理：选择土茯苓野生植物根状茎为外植体，用自来水冲再用蒸馏水冲洗，切取侧芽，将侧芽组织置于超净工作台中，用75％酒精消毒30～用浓度为0.1％～0.2％升汞溶液消毒6～10分钟，无菌水冲洗3～5次，最后用滤纸水，无菌条件下剥取侧芽生长锥；

丛生芽诱导培养：将剥取的侧芽生长锥接种到丛生芽诱导培养基MS+BA 1.0～+IBA 0.1～0.5mg/L+NAA 0.1～0.5mg/L+蔗糖20～30mg/L+琼脂6～7mg/L中，培养期为30天；

增殖培养：将诱导出的丛生芽接种到增殖培养基MS+BA 2.0～4.0mg/L+NAA 0.2～+蔗糖20～30mg/L+琼脂6～7mg/L中进行继代培养，30天继代一次，连续转接3期为90天；

壮苗培养：将增殖培养出的丛生芽切成单芽或者小丛芽，接种到壮苗培养基MS+BAmg/L+KT 0.5～0.7mg/L+IBA 0.1～0.3mg/L+蔗糖20～30mg/L+琼脂6～7mg/L期为30天；

(5)生根培养：将壮苗培养后的开叶的小苗接种到生根培养基1/2MS+NAA 0.5～0.9mg/L+IBA 0.1～0.5mg/L+蔗糖20～30mg/L+琼脂6～7mg/L中，培养期为40天；

步骤(2)～(5)中所述培养基pH值为5.5～5.8，培养温度为23℃～27℃，光照时间为10～14小时/天，光照强度为100μmol/m²·S。

步骤(2)所述的丛生芽诱导培养基的优选为：MS+BA 1.0mg/L+IBA 0.1mg/L+NAA0.1mg/L+蔗糖25mg/L+琼脂7mg/L。

步骤(3)所述的增殖培养基的优选为：MS+BA 2.0mg/L+NAA 0.2mg/L+蔗糖25mg/L+琼脂7mg/L。

步骤(4)所述的壮苗培养基的优选为：MS+BA 0.8mg/L+KT 0.5mg/L+IBA 0.1mg/L+蔗糖25mg/L+琼脂7mg/L。

步骤(5)所述的生根培养基的优选为：1/2MS+NAA 0.5mg/L+IBA 0.1mg/L+蔗糖25mg/L+琼脂7mg/L。

本发明的优点在于：选用配方合理的培养基，培养出的组培苗生根率高，稳定性好。该方法易操作，而且不受外界条件的限制，四季皆可进行，节约育苗占地面积，降低生产成本，不污染环境，可以实现批量生产。通过本发明方法生产土茯苓，产量大，成本低，周期短，极具市场竞争力。

具体实施方式

通过下面给出的具体实施例可以进一步清楚地了解发明的内容，但不是对本发明的限定。

实施例1：

土茯苓组培苗的培养方法，该方法包括如下步骤：

(1)外植体的选择及无菌处理：植物外植体的选择及无菌处理：选择土茯苓野生植物根状茎为外植体，用自来水冲洗干净，再用蒸馏水冲洗，切取侧芽，将侧芽组织置于超净工作台中，用75％酒精消毒60秒，再用0.1％升汞溶液消毒6分钟，无菌水冲洗3次，最后用滤纸吸干无菌水，无菌条件下剥取侧芽生长锥；