[发明专利]用于HIV基因分型的全基因组探针杂交检测方法无效
| 申请号： | 201110077724.2 | 申请日： | 2011-03-30 |
| 公开（公告）号： | CN102140552A | 公开（公告）日： | 2011-08-03 |
| 发明（设计）人： | 刘建礼;朱红;张绍福 | 申请（专利权）人： | 中华人民共和国北京出入境检验检疫局 |
| 主分类号： | C12Q1/70 | 分类号： | C12Q1/70;C12Q1/68 |
| 代理公司： | 北京正理专利代理有限公司 11257 | 代理人： | 张文祎 |
| 地址： | 100026*** | 国省代码： | 北京;11 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 用于 hiv 基因 基因组 探针 杂交 检测 方法 | ||
1.一种用于HIV基因分型的全基因组探针杂交检测方法，其特征在于，该方法包括以下步骤：
（1）制备待测样品的cDNA；
（2）设计并制备出PCR扩增引物；所述引物为序列表中SEQ ID No: 76- No: 87所示的核苷酸序列；
（3）使用步骤（2）中所述引物采用巢氏PCR方法对步骤（1）中所述cDNA进行PCR扩增；
（4）纯化上述扩增产物；
（5）标记纯化的扩增产物：使用巢式PCR扩增的第二轮反向引物和荧光素Cy5-dCTP进行标记；
（6）将标记产物与基因芯片杂交、洗涤；
其中，所述基因芯片为包括固相载体和固定在该固相载体上的寡核苷酸探针，所述寡核苷酸探针为序列表中SEQ ID No: 1- No: 75所示的核苷酸序列；
（7）用基因芯片扫描仪获取杂交信号并分析鉴定杂交结果，从而确定所检测的基因亚型。
2.根据权利要求1所述的用于HIV基因分型的全基因组探针杂交检测方法，其特征在于，在所述步骤（3）中，使用步骤（2）中所述引物采用巢氏PCR方法对步骤（1）中所述cDNA分三段分别进行二轮PCR扩增。
3.根据权利要求1所述的用于HIV基因分型的全基因组探针杂交检测方法，其特征在于，在所述步骤（5）中，使用巢式PCR扩增的第二轮反向引物分三段和荧光素Cy5-dCTP进行标记。
4.根据权利要求1所述的用于HIV基因分型的全基因组探针杂交检测方法，其特征在于，在所述步骤（6）中，杂交温度为40℃，杂交时间为16h。
5.根据权利要求1所述的用于HIV基因分型的全基因组探针杂交检测方法，其特征在于，所述基因芯片的固相载体选自硝酸纤维素膜、尼龙膜、聚苯乙烯或载玻片。
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