[发明专利]激光镊子及微流控对肿瘤微粒体的检测法及检测器

说明书

技术领域

    本发明涉及对肿瘤微粒体的检测方法及检测设备，尤其涉及一种激光镊子及微流控对肿瘤微粒体的检测法及检测器。

背景技术

近几十年以来，肿瘤发病率逐年升高，且死亡率居高不下, 已成为生命的头号杀手。肺癌和乳癌的发病率和病死率在中国和世界上分居首位。

目前对肿瘤最棘手问题是如何及早发现并及时进行规范治疗。仪器检查如核兹共振、CT及病理切片检查只能针对比较晚期的患者而且对机体带来创伤。生化方法如 ELISA法等由于其不稳定, 敏感性不够高的原因，这些方法并不适用于肿瘤的早期诊断。

肿瘤细胞能产生特异肿瘤微粒体。由细胞内的多胞体与细胞膜融合分泌出来，因此带有双脂层和很多膜蛋白。它能帮助肿瘤细胞与周围组织进行交流，从而有利肿瘤细胞的生长和扩散。与肿瘤侵袭性密切相关。肿瘤微粒体常常含有肿瘤生物标志蛋白，因此能成为激光微流控技术的特异靶物。

本发明结合激光镊子与微流控技术，可以检测到单个肿瘤微粒体颗粒，与现有检测技术相比较，具有高特异性、操作简单、检测时间短、灵敏度高、重复性好、血样可再检测等特点，是肿瘤检测的革命性突破，它可快速、灵敏地检测早期肿瘤。同时有助于肿瘤致病机理的研究了解，及时跟踪病情，了解治疗进程。

发明内容

本发明针对现有技术中不能反映肿瘤早期病变的状况，提供了一种检测快速、简便，操作容易，高特异性、高灵敏度，低成本的激光镊子及微流控对肿瘤微粒体的检测法及检测器。

为了解决上述技术问题，本发明通过下述技术方案得以解决：

激光镊子及微流控对肿瘤微粒体的检测法，包括下列步骤：

步骤a：通过半导体泵浦固态激光发射器发射的400nm~1200nm的近红外激光束形成不同偏振态的激光镊子；

步骤b：用双光束双激光镊子聚焦并捕获微流控芯片管腔（6）内的结合肿瘤微粒体抗体颗粒物；

步骤c：将经过滤后的待测样品(血清和其它体液)注入微流控芯片管腔（6）内与被激光镊子捕获的结合肿瘤微粒体抗体颗粒物混合。

步骤d：位置敏感光探测器或其它检测相关物理参数的检测器检测微流控芯片管腔（6）中与样品混合后的结合肿瘤抗体颗粒物的物理参数（包括但不局限于以下参数：颗粒物形状及大小、颗粒物密度、颗粒物折射率、颗粒物散射率、颗粒物介电常数、颗粒物阻尼系数）的改变；

步骤e：根据物理参数的改变对待测样品中的肿瘤微粒体进行定性及准确定量。

作为优选，所述的步骤b中的肿瘤微粒体抗体的制备方法包括下列步骤：

步骤f：用EZ-Link NHS-PEG12-Biotin试剂盒将预先购买的肿瘤微粒体抗体进行生物素标记；所述的EZ-Link NHS-PEG12-Biotin试剂是指可用于对普通蛋白质包括抗体进行快速有效的生物素标记的试剂， 由美国Pierce公司（现为美国Thermo Scientific 公司）生产。

步骤g：将生物素标记的肿瘤微粒体抗体联接到有链霉亲和素聚合物颗粒上，形成结合肿瘤微粒体抗体颗粒物。

作为优选，所述的步骤b中的结合肿瘤微粒体抗体颗粒物的大小为80nm-20um。

作为优选，所述的步骤b中的微流控芯片的制备方法包括下列步骤：

步骤i：利用绘图软件绘制微流控芯片掩膜版图，并使用分辨率为12000dpi的激光打印机打印，在透明胶片上制得光刻掩膜板。

步骤j：将玻璃基片置分别置于丙酮、酒精中进行超声处理，然后置于浓H₂SO₄中煮沸，用去离子水冲洗干净，氮气吹干，热烘去除水汽；

步骤k：在清洗完毕的玻璃基片表面甩涂光刻胶，软烘、曝光、显影，获得所需刻蚀掩膜层的图形，置于130摄氏度的烘箱中进行硬烘；

步骤l：将硬烘后的玻璃基片置于摩尔比为HF : NH4F : H2O为3 : 6 : 9的腐蚀液中进行刻蚀；

步骤m：将刻蚀后的玻璃基片打孔，并与另一表面甩涂紫外光学胶的玻璃基片贴合，形成封闭的微管道和腔体结构，置于强紫外光源下照射，完成固化键合。

作为优选，所述的步骤d中结合肿瘤微粒体抗体颗粒物的物理参数为颗粒物形状及大小、颗粒物密度、颗粒物折射率、颗粒物散射率、颗粒物介电常数、颗粒物阻尼系数中的任何一种。

激光镊子及微流控对肿瘤微粒体的检测器，包括激光器系统、纳米定位系统、摄像系统、光学部件、机械部件、数据采集和传输系统、自动控制和图像处理应用软件。