[发明专利]兴仁金线莲试管苗的培育方法

说明书

技术领域

本发明涉及植物组织培育技术领域，特别是涉及兴仁金线莲试管苗的培育方法。

背景技术

兴仁金线莲（A.xingrenensis Z.H.Tsi et X.H.Jin）是兰科(Orchidaceae)、开唇兰属(Anoectochilus)多年生草本植物，同花叶开唇兰、台湾金线莲、高雄金线莲等统称金线莲，在民间作药用，可消炎、解毒、止血降压、强心利尿，对急性肝炎、慢性肝炎、急慢性肾炎、肾衰竭、高血压、糖尿病、妇科疾病、癌症等有非常明显的疗效，因此在民间有“药王、神药、金草”之称。据报导，金线莲中氨基酸组成、成分、含量及抗衰老活性微量元素的含量均高于西洋参和野山参。金线莲作为一种珍贵药物，价格一直很高，2010年在国内鲜草收购价达400-600元／kg，干草价格更高达1500-2000元／kg。另外兴仁金线莲株型小巧，叶型美观，具有极高的观赏价值。

兴仁金线莲种子只有在真菌共生的情况下才能萌发，萌发率低。在自然界，金线莲是许多虫、鸟、鼠、蛇等喜食的植物。由于人类活动，生态环境受到破坏，在利益驱使下，又遭受毁灭性的采集，现已处于极度濒危状态。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是克服现有野生兴仁金线莲种子萌发率低而濒临灭绝的缺陷，提供一种兴仁金线莲试管苗的种培育方法，该方法经过对培养基的筛选，优选出适合兴仁金线莲试管苗培育的培养基，繁殖系数达10倍以上，苗粗壮，移栽成活率在95%以上。

为了解决上述技术问题，本发明采用如下的技术方案：

本发明兴仁金线莲试管苗的培育方法：选择带腋芽的茎段作外植体，进行从生芽诱导和增殖培养，然后将从生芽转接到壮苗生根培养基中进行壮苗生根培养，即得试管苗，其中：

从生芽诱导和增殖培养的培养基为：

MS + (2～5)mg/l 6-BA + (0.2～0.5)mg/l NAA + 8g/l琼脂 + 30g/l糖 pH：5.7～6.0；

壮苗生根培养基为：

（1/2MS ～MS）+(0.01～0.05)mg/l 6-BA + (0.05～0.10)mg/l NAA + 8g/l 琼脂 + （15～25）g/l 糖 pH：5.7～6.0。

上述兴仁金线莲试管苗的培育方法中，在进行壮苗生根培养时，其培养条件为光照16h/d、光照强度500～1200lux，温度23～27℃，每2个月对培养室进行1次消毒。

与现有技术相比，本发明通过对试管苗培育时所采用的培养基的筛选，优选出了适合兴仁金线莲试管苗培育的培养基，使繁殖系数达10倍以上，所得试管苗粗壮，试管苗的移栽成活率可达95%以上，另外，本发明采用的是常规的试管苗培育方法，该方法简单、成熟，非常适合推广应用。

具体实施方式

下面结合具体实施方式详细说明本发明的技术方案，兴仁金线莲试管苗的培育方法：

（1）外植体选择与无菌体系的建立：选择生长健壮的植株，取1cm长的带腋芽的茎段作外植体，将茎段清理干净，先放入洗衣粉水中漂洗3～5分钟，然后用流水冲洗30分钟，在超净工作台中，用75%酒精湿润5～8秒，放入0.1％的HgCl溶液中灭菌9～13分钟后取出，用无菌水冲洗5～6次；

（2）从生芽诱导及增殖培养：将无菌处理后的外植体接种于从生芽诱导培养基上，进行从生芽诱导培养，一般接种7～10天开始萌发，当从生芽萌发到0.5cm长时，将其剖开，转接至增殖培养基上作进一步的增殖培养，转接时清除增殖培养时出现的白化苗；

从生芽诱导和增殖培养培养基的筛选：

试验通过用MS、1/2MS、MS的改良培养基（大量元素减半、微量元素加倍），6-BA的用量从1～6mg/L，NAA的用量从0.1～1.5mg/L，经过正交试验等大量的筛选试验。得出如下较理想的培养基组合：

MS + (2～5)mg/l 6-BA + (0.2～0.5)mg/l NAA + 8g/l琼脂 + 30g/l糖 pH：5.7～6.0；

（3）壮苗生根培养：在从生芽生长过程中，同时也会长不定根，当从生芽长成1-2cm高的小苗时，转接至生根壮苗培养基中进行生根壮苗培养，每2个月对培养室进行1次消毒，如果光照过强，试管苗的白化现象严重，并且兴仁金线莲容易被污染，故每2个月对培养室进行消毒，可采用甲醛熏蒸，培养室也可采用臭氧杀菌机进行杀菌；

生根壮苗培养基的筛选：