[发明专利]高效液相色谱法测定复合维B+双氯芬酸钠片中维生素B12含量的方法

说明书

技术领域

本发明涉及药物含量测定领域，具体涉及一种高效液相色谱法测定复合维B+双氯芬酸钠片中维生素B₁₂含量的方法。

背景技术

复合维B+双氯芬酸钠片产品为外贸出口品种，主要市场在非洲大陆尼日利亚等国家，在当地是一国际名牌产品，每年销量5000万片以上，价格上有强劲优势。但由于该产品在国内外均没有现成的法定检验标准，按照外国公司提供的内部标准检验只能检出维生素B₁与维生素B₆及双氯芬酸钠的含量，维生素B₁₂的含量没有方法检测和做鉴别的要求。

由于没有方法检验出复合维B+双氯芬酸钠片中维生素B₁₂的含量，本申请人曾发生过出口产品被尼日利亚国家海关扣封的事件。于是，本申请人痛定思痛，决定对该产品检验技术进行技术攻关，填补该标准上维生素B₁₂检验的空白。

本处方制剂最主要的难点是维生素B₁₂在处方中用量极少(50μg/510mg)，理论上仅有可能做色谱鉴别或者理化辨别。维生素B₁₂及其制剂在CP2005、BP2009、USP31中均收载有检验方法，但均是以单方和规格量较大形式建立的法定标准，且最小单元重量合理，便于检验上样品纯化处理，检验方法相对成熟。上述标准中的方法经过试验结果不好，一是量小检不出，如果加大称样量，样品溶液非常难纯化处理，不符合微量分析思维逻辑；二是虽然客服了操作方法纯化处理好样品溶液，但维生素B₁与维生素B₆及双氯芬酸钠有干扰峰出现，无法给维生素B₁定位和计算含量。试验成功希望渺小。花高价请上级部门药检所和国外药检实验机构做维生素B₁₂鉴别或含量，均检测不出维生素B₁₂。

发明内容

本发明的目的在于，提出一种高效液相色谱法测定复合维B+双氯芬酸钠片中维生素B₁₂含量的方法，以准确可靠地测定复合维B+双氯芬酸钠片中维生素B₁₂的含量。

为了实现上述目的，本发明提出的高效液相色谱法测定复合维B+双氯芬酸钠片中维生素B₁₂含量的方法包括：

(1)在避光条件下往维生素B₁₂对照品中加流动相溶解制备对照品溶液：

(2)在避光条件下将复合维B+双氯芬酸钠片样品除去包衣，研细后加入流动相并用超声波溶解，摇匀后离心沉淀，取上清液，称定重量，加热煮沸后放冷，再滴加流动相至煮沸前的重量，摇匀，过滤，制得供试品溶液：

(3)色谱条件：

色谱柱选用十八烷基硅烷键合硅胶柱；

以甲醇和0.05moL/L磷酸二氢钾溶液体积比为22∶78作为流动相，磷酸二氢钾溶液的PH值为6.4；

柱温为35℃；

检测波长为361nm；

流速为1.0mL/min；

进样量为20μL。

本发明方法对复合维B+双氯芬酸钠片中维生素B₁₂含量的测定结果准确、可靠，方法简便、科学，试验时间短，无干扰峰，分离度、拖尾因子、不对称度均符合中国药典求，检测结果良好。

具体实施方式

1.仪器与试药

采用LC-10ATvp日本岛津高效液相色谱仪，SPD-10Avp紫外检测器，美国制造P/N(7725i)手动进样器，浙江大学N-2000数据工作站，柱温箱，电子天平为十万分之一分析天平，DD80型超声脱气机，800型离心机。维生素B₁₂对照品从中国药物生物制品检定所购买(批号：100248-200802，供HPLC法含量测定，含量95.5％)，复合维B+双氯芬酸钠片样品自产(批号为091011)，甲醇为一级色谱纯(产地：天津四友精细化学品有限公司出品)，水为双蒸馏水(自制)，其他试剂为分析级试剂。

2.色谱条件

色谱柱选用十八烷基硅烷键合硅胶柱，尺寸为4.60mm×250mm，填料为Hypersi1 ODS2，填料的粒径为5μm。以甲醇和0.05moL/L磷酸二氢钾溶液体积比为22∶78作为流动相，用10％磷酸溶液或者2moL/L氢氧化钾溶液把磷酸二氢钾溶液的PH调为6.4，流动相使用前先用超声脱气机超声脱气处理30分钟，以去除流动相中的气泡，柱温为35℃，紫外检测器的检测波长为361nm，流速为1.0mL/min，进样量为20μL。