[发明专利]一种筛选敏感型难治性癫痫药物的方法

说明书

技术领域

本发明属生物医药领域，涉及药物筛选的方法，具体涉及一种筛选敏感型难治性癫痫药物的方法。

背景技术

癫痫是一种以反复发作的神经元异常放电导致中枢神经系统功能失常为特征的常见的神经科疾病，据研究报道，其中超过1/3的患者表现为频繁出现的难以被单一或联合应用抗癫痫药物所控制的癫痫发作，临床通常称之为难治性癫痫。近年来，该疾患的抗癫痫药物(antiepileptic drugs，AEDs)治疗和外科手术治疗取得了很大进展，但难治性癫痫仍然是困扰临床医生的一个重要难题。这种难以控制且频繁出现的癫痫发作会导致很严重的后果，其中包括生命期限缩短、身体外伤、神经心理和精神障碍，以及社会能力障碍等，严重影响患者的工作能力和生活质量，给国家、社会及患者家庭带来沉重的精神及经济负担。

药物抵抗是难治性癫痫病的一个重要特征，目前，其发生机制尚不明了，主要存在两种假说：AEDs作用靶体发生改变和多种抗药蛋白过度表达。绝大多数难治性癫痫患者的一个重要特征就是对多种AEDs均有抗药性，而这些药物的作用机制并不相同，这种多药抵抗性对药物作用特定靶点发生改变导致抗药性的假说提出了质疑，同时提示可能存在某种非特异性机制导致患者对多种AEDs抵抗，其中多药转运体过度表达假说获得了广泛关注。

P-糖蛋白(P-glycoprotein，Pgp)是ATP结合蛋白超家族多药转运体中的重要成员。目前多项研究结果均提示，难治性癫痫多药抵抗的多药转运体假说在生物学上是可能的，但尚缺乏有力的证据来证实这一假说。虽然在人类难治性癫痫的致痫脑组织中检测到Pgp的过度表达，但这一研究结果缺乏有效的实验对照组，因为将其与药物敏感型癫痫患者相应脑组织中的Pgp表达水平相比较是不可能的-这样的患者不会进行外科手术治疗。因此，该领域需要通过能够出现反复自发性痫性发作(spontaneous recurrent seizures，SRS)的癫痫动物模型，然后通过给予抗癫痫药物筛选出药物敏感型和药物抵抗型亚组，从而研究血脑屏障中Pgp的表达在药物敏感组和药物抵抗组中是否存在差异，区域范围，以及发挥的病理生理学作用。以便开发出相应的靶向治疗药物，为治疗难治性癫痫服务。

发明内容

本发明的目的是提供一种筛选难治性癫痫药物的方法，尤其涉及一种筛选敏感型难治性癫痫药物的方法。

本发明方法通过建立一种能够出现反复自发性痫性发作的癫痫动物模型，然后通过给予抗癫痫药物筛选出药物敏感型和药物抵抗型亚组，从而研究难治性癫痫相关危险性因子的表达在药物敏感组和药物抵抗组中是否存在差异，区域范围，以及发挥的病理生理学作用，进一步开发靶向治疗难治性癫痫的药物。

具体而言，本发明的一种筛选敏感型难治性癫痫药物的方法，其特征在于，其包括步骤：

1、建立反复自发性痫性发作的癫痫动物模型

实验动物选用体重为200-230g的雌性Sprague-Dawley大鼠(购自中国科学院上海实验动物中心)；

诱导带电极的实验动物产生癫痫持续状态(SE)及自发性反复痫性发作(SRS)，

2、苯巴比妥筛选药物敏感型组和药物抵抗型组：

3、选出药物敏感型和药物抵抗型亚组，

4、研究难治性癫痫相关危险性因子的表达在药物敏感组和药物抵抗组中是否存在差异，区域范围，以及发挥的病理生理学作用；

5、获得新的治疗靶点及解决方法，开发靶向治疗难治性癫痫的药物。

本发明中，按现有技术建立带电极的实验大鼠模型，所述的电极包括刺激电极和记录电极，通过导线连接四孔接插件，与刺激器及脑电图放大器连接。

本发明中，电刺激诱导带电极的实验大鼠产生癫痫持续状态，本发明的一个实施例中，刺激时间为25分钟；电刺激为每毫秒转换正负电极的方波序列组成；时限为100ms，频率为2次/s，序列内部的脉冲频率为50次/s；峰刺激强度为700uA；

本发明中，实验大鼠出现全面性强制-痉挛发作癫痫持续状态(SSSE)2小时以后，给予地西泮终止SSSE。

本发明中，实验开始4周后，对实验动物进行视频脑电图监测，本发明的一个实施例中，最长监测期为2个月。