[发明专利]一种齿肋赤藓原丝体的培养与保存方法

权利要求书

1.一种齿肋赤藓原丝体的培养方法，其特征在于，所述的具体培养步骤包括：

(1)材料选择与处理：在古尔班通古特沙漠选择以齿肋赤藓为建群种发育良好的藓类结皮斑块，挑选一些生长健壮的齿肋赤藓植株；先用自来水冲洗干净，再用无菌蒸馏水反复冲洗；在无菌操作台将清洗干净的苔藓植株在70％的酒精浸泡消毒20s，取出后再用无菌蒸馏水冲洗3-4次；将清洗干净的苔藓植株置于无菌操作台上用无菌风自然风干；在已灭菌的研钵内，将风干的苔藓植株轻微研磨成碎片待用；

(2)接种与培养：将上述步骤获得的苔藓碎片用无菌蒸馏水稀释，然后接种在盛有BG₁₁固体培养基的培养皿中，用parafilm封口膜封口；将培养皿置于光照培养箱中，温度22℃，采用光照强度27μmol·m^-2·s^-1，光照条件和黑暗条件分别为14h、10h，而且为两者交替进行；培养3周后，苔藓碎片上开始长出原丝体，再过10d后在无菌操作台上收集苔藓原丝体；

(3)扩大培养：将上述制备获得的苔藓原丝体转入装有BG₁₁液体培养基的200ml培养瓶中，BG₁₁培养基中添加2％W/W的蔗糖，温度22℃，光照强度27μmol·m^-2·s^-1；培养3-4周后，再次将原丝体转入10L大培养瓶中，液体培养基5-6L，通气培养，通气量为5L·h^-1，其它培养条件不变，培养一个月可采收。

2.一种如权利要求1所述齿肋赤藓原丝体的培养方法，其特征在于，所述的在制备BG₁₁固体培养基琼脂粉添加量为15g·L^-1，121℃灭菌30min，然后将培养基倒入直径为90mm的培养皿中。

3.一种如权利要求1或2任意所述齿肋赤藓原丝体的培养方法，其特征在于，所述的BG₁₁固体培养基，每升BG₁₁培养基组分含有：硝酸钠1.5g，，磷酸氢二钾0.04g，硫酸镁0.07g，氯化钙0.036g，柠檬酸0.006g，柠檬酸铁胺0.006g，乙二胺四乙酸钠盐0.001g，碳酸钠0.02g，微量元素A₅溶液1mL，琼脂粉添加量为15g·L^-1，其中，A₅溶液组分按照每升重蒸水中加入H₃BO₃ 2.86g，MnCl₂.4H₂O 1.86g，ZnSO₄·7H₂O 0.22g，Na₂MoO₄·2H₂O 0.39g，CuSO₄·5H₂O 0.08g，Co(NO₃)₂·6H₂O 0.05g。

4.一种通过权利要求1所述培养方法制备获得齿肋赤藓原丝体的保存方法，其特征在于，所述的具体培养步骤包括：

(1)将采收的苔藓原丝体置于阴凉通风处风干；

(2)风干后的苔藓原丝体置于无菌封口塑料袋于-40℃冰箱中保存备用，用叶绿素a的荧光值(Fv/Fm)表示其光合活性，室温下测得浓度为2g·L-1的原丝体的荧光值(Fv/Fm)是0.36±0.01。