[发明专利]一种含有癸酸的缓释组合物

说明书

技术领域

本发明属于生物医药领域，涉及了一种含有癸酸的缓释组合物，具体地说涉及一种含有癸酸的缓释组合物在发酵制备达托霉素的方法中的应用。

背景技术

达托霉素(Daptomycin)(化学式一为达托霉素的化学式)是自链霉菌(S.reseosporus)发酵液中提取得到的一个环酯肽类物质，它不仅具有新颖的化学结构，且其作用模式也与任一已获准抗生素不同：它能在多个方面破坏细菌细胞膜功能，由此迅速杀死革兰阳性菌。达托霉素除能作用于大多数临床相关革兰阳性菌外，更重要的是在体外对已呈甲氧西林(Methicillin)、万古霉素和利奈唑胺等耐药性分离菌株仍具强力活性。

化学式一

目前，达托霉素主要是通过发酵法生产，并且在生产过程中需要补加前体物质癸酸，然而癸酸的补加需要控制在一定水平之内，当癸酸浓度过高时，高毒性前体会使菌体生长受到一定的抑制；而癸酸浓度低时，供应不足，达托霉素合成率低。卢文玉等在《癸酸抗性突变株流加发酵法生产达托霉素》(天津大学学报，2006年，第39期，第20-24页)公开了在7.5L的发酵罐生产上，采用连续流加补料的工艺来消除前体的抑制作用，制备所得的达托霉素效价为210mg/L。余继叁等在《玫瑰孢链霉菌NRRL113789产达托霉素前体物A21978C的发酵培养基优化》(安徽农业科学，2008年，第36卷第19期，第7974-7976页)一文中公开了在摇瓶发酵中通过优化发酵培养基来提高达托霉素产量，最终A21978C组分的发酵单位为60mg/mL，对于A21978C生物修饰后的达托霉素没有公开相关数据。

综上可以得知，目前没有公开摇瓶发酵制备达托霉素的相关文献，且摇瓶发酵过程中补加癸酸由于不能实现自动化微量连续流加补料，一般采用多次补料，这样不仅容易引起 发酵染菌，而且由于癸酸浓度过高抑制菌体生长，从而使发酵单位较低。

发明内容

本发明提供了一种含有癸酸的缓释组合物，按重量百分数计，它含有如下有效量的组分：癸酸3.0～10.0％，乙醇3.0～8.0％，硬脂酸0.5～1.0％，聚乙二醇1.0～2.0％，琼脂粉1.0～2.0％，水77.0～91.5％；更优选为癸酸6％，乙醇6％，硬脂酸0.7％，聚乙二醇(PEG)1.1％，琼脂粉1.2％，水85％。

本发明还提供了该缓释组合物的制备方法，其步骤如下：

称取缓释组合物的各组分；

将称取好的癸酸与乙醇混合均匀，除菌；

按配比将称取好的硬脂酸、聚乙二醇、琼脂粉和水混合，高温灭菌；

无菌条件下将已除菌癸酸与乙醇混合液加入 混合液中，混合均匀；

无菌条件下将 混合液滴入无菌的0～10℃二甲基硅油中，制成缓释滴丸；

将制备好的缓释滴丸用无菌纸吸去表面的油，并低温保存。

本发明还提供了该缓释组合物在发酵制备达托霉素的方法中的应用，即在含有可同化的碳、氮源和无机盐的液体培养基中进行需氧发酵条件下，在特定时间将一定量的含有癸酸的缓释组合物加入培养液中，从而提高达托霉素合成效率。本发明所提供的发酵制备达托霉素的方法包含如下步骤：

a.将玫瑰孢链霉菌接种于斜面培养基上，于30℃好氧培养10天；

b.将步骤a培养的菌接种于20-50ml液体种子培养基上于28-32℃，220rpm振荡培养30-48h；

c.将b培养的菌按接种量2-10％接种于发酵培养基中，30℃，220rpm振荡培养8天；

d.自接种发酵培养20-48h开始补加含有癸酸的缓释组合物，每升发酵液每小时补加含0.1-0.4ml癸酸的缓释组合物，每间隔24-72h补加一次，直至发酵204h结束；

e.采用岛津LC-20A液相色谱仪检测达托霉素，补加前体后每间隔24h取样检测；

f.第一次补料后24h镜检，发酵结束时，3000rpm离心测相对生物量。

本发明对步骤a中的斜面培养基配方进行了优选，优选地，上述步骤a中斜面培养基组成为：酵母提取物4g/L，麦芽提取物10g/L，葡萄糖4g/L，琼脂15g/L。

本发明对步骤b中的种子培养基配方进行了优选，优选地，上述步骤b中种子培养基组成为：糊精20g/L，蛋白胨10g/L，酵母提取物3g/L，K₂HPO₄ 0.1g/L，NaCl 0.2g/L。