[发明专利]储存宫内膜干细胞的方法

说明书

技术领域

本发明属于细胞分离培养与保存相关技术，尤其是从经血中分离宫内膜间充质干细胞，宫内膜干细胞株的建立，以及相应的培养和保存技术。

背景技术

干细胞技术是当今生命科学中最热门的技术之一，其研究内容几乎涉及所有生命科学的生物医学领域，除了在细胞治疗、组织/器官移植和基因治疗中发挥重要作用外，还在发现新基因、基因功能分析、发育生物学模型及新药开发等方面产生重要影响。近几年来，干细胞的研究取得了重大突破，1999和2000年，世界最权威的美国《Science》杂志连续2年将干细胞和人类基因组计划列为当年的10大科学突破，尤其是在1999年甚至将干细胞研究列为第一位。干细胞很可能在医学领域引发革命性进步，因而具有不可估量的医学价值，引起了全世界的广泛关注和研究，美国《时代》周刊认为干细胞和人类基因组计划将同时成为新世纪最具有发展和应用前景的领域。

间充质干细胞(mesenchymal stem cells，简称MSCs)是来源于成熟组织中的多能干细胞，具有高度自我更新能力和多向分化潜能，是细胞移植和组织工程的新型种子细胞，具有广阔的应用前景。其中，研究最为广泛的MSCs是来源于骨髓的间充质干细胞，尽管其伦理问题与胚胎干细胞相比大为减少，但骨髓细胞必须通过侵入的途径获得，而且随着年龄的增长，干细胞数量显著减少。

众所周知，子宫内膜细胞系具有很强的自我更新能力。在每个月经周期都会有组织和血管的大量增长，这一增长过程会随着月经周期的结束而停止。美日中等多国科学家的最新研究显示在随女性经血脱落的子宫内膜组织中，具有相当数量的间充质干细胞(基质干细胞)——宫内膜干细胞，数量为骨髓来源的30倍；这些干细胞活力更强，更强的自我更新和增殖能力(如心肌细胞的培育效率为传统利用骨髓细胞培育的100倍)，分化潜能更接近胚胎干细胞。有研究发现子宫内膜的再生细胞(ERC)不仅具有几乎每24小时复制一次的惊人速率，而且它们产生独特生长因子的速率，比来自于脐带血的干细胞要大上10万倍。如果把这些干细胞通过科学的方法储存起来，在女性未来的一生中，一旦发生肿瘤等重大疾病或意外严重伤害时，就可立即做自体干细胞的移植，恢复健康，减轻自己及家人的经济负担，减轻社会负担，还有可能实现女性梦寐以求的“青春常在”、“红颜永驻”的美好愿望，拥有高品质的人生。女性的宫内膜干细胞不但可用于本人，还可为她的子女、相关亲属(如堂表弟妹，甚至父母)等人的临床应用。

由于国内所实行的独生子女政策，一旦患血液系统恶性疾病和遗传性疾病，就只能采用异基因干细胞移植，宫内膜干细胞是异基因干细胞移植最丰富最好的资源。一旦储存了宫内膜干细胞，就相当于为其整个家族建立了一个预防和治疗肿瘤及其它相关需干细胞治疗疾病的生命银行。储存的宫内膜干细胞还可供全国和全世界患者选择作干细胞移植用，并逐步替代价格昂贵、难以找到配型相合的骨髓干细胞。全世界等待干细胞移植的患者数以亿计，仅白血病在我国的发病率就达十万分之三、四，即每年新增四万名左右的患者，而累计的白血病患者约有四百万，其中大部分是儿童，他们都急需通过干细胞移植来救治。

目前有经血标本的储存方法是获得经血标本后，经过初步分离，去除大部分的红细胞，然后直接添加冻存液冻存。

发明内容

本发明要解决的技术问题是提供一种储存宫内膜干细胞的方法。本发明针对现有干细胞来源困难或受伦理限制等问题，寻找一种更为高效的来源广泛且不受伦理限制的宫内膜干细胞分离和培养方法。在此基础上，扩增和纯化干细胞，并对所培养的干细胞进行形态和功能鉴定，从而建立具有干细胞特性的新型干细胞株，然后再将优质的干细胞资源储存。本发明的优越之处在于女性废弃的月经血来源广泛，干细胞含量丰富，先通过高效的分离方法能够保证被储存的干细胞的质量。

为了解决上述技术问题，本发明提供一种储存宫内膜干细胞的方法，依次包括以下步骤：

1)、准备采集套装和配制培养基：

采集管1：装有20ml Hank′s平衡盐溶液(HBSS)，并添加以下成分至以下浓度：万古霉素(Vancomycin)60～100μg/mL、头孢氨苄(Claforan)150～350μg/mL、卡那霉素(Amikacin)50～150μg/mL、庆大霉素(Gentamycin)80～160μg/mL、两性霉素B(Amphotericin B)2～3μg/mL及300～500单位肝素；

采集管2：装有10ml Hank′s平衡盐溶液(HBSS)，并添加150～250单位肝素；