[发明专利]一种藻类叶绿体DNA的提取方法

权利要求书

1.一种藻类叶绿体DNA的提取方法，其特征包括以下步骤：

1)选取新鲜或冷冻藻体，洗净沥水后，称取20-60g藻体，加150-300ml缓冲液A，用组织匀浆机在0-4℃下，匀浆成藻液；

2)将匀浆后的藻液用尼龙布过滤，将滤液离心处理后，弃上清液，取沉淀物；

3)在沉淀物中加入10-30ml缓冲液B，在60-70℃下水浴裂解1-2h，得到裂解液；

4)将裂解液用体积比24～26∶23～25∶1的酚-氯仿-异戊醇和体积比23～25∶1的氯仿-异戊醇处理去除变性蛋白质，再加入CsCl和Hoechst 33258，以360,000-400,000×g离心力离心8-12h，其中CsCl与Hoechst 33258的加入量为终浓度1.35-1.65g/ml和10-30μg/ml；

5)迅速取出含叶绿体DNA的条带，用0.8-1.2M NaCl饱和异丙醇去除Hoechst33258；

6)在去除Hoechst 33258的叶绿体DNA溶液中加入浓度2.5-3.5M的醋酸钠、双蒸水和异丙醇，体积比为1.5～2.5∶1.5～2.5∶3.5～4.5∶4.5～5.5，混合均匀后混合液在-20℃下，放置20-40min；

7)将混合液以12,000-16,000×g离心力离心15-30min，得到的沉淀经过65-75％乙醇洗涤去杂后，即得纯的藻类叶绿体DNA；

其中，所述的缓冲液A的组分及配比如下：

调节pH至7-8，补充水至1L；

所述的缓冲液B的组分及配比如下：

调节pH至7-8，补充水至1L。

2.根据权利要求1所述的提取方法，其特征在于所述步骤2)中的离心处理是在3,000-6,000×g离心力下离心5-10min。

3.根据权利要求1所述的提取方法，其特征在于所述步骤5)是采用注射器在紫外灯照射下，迅速取出含叶绿体DNA的条带。

4.根据权利要求1所述的提取方法，其特征在于所述缓冲液A的组分及配比为：

调节pH至7.5，补充水至1L。

5.根据权利要求1所述的提取方法，其特征在于所述缓冲液B的组分及配比为：

调节pH至7.5，补充水至1L。

6.根据权利要求1所述的提取方法，其特征在于所述尼龙布为40-100目。

7.根据权利要求1所述的提取方法，其特征在于所述步骤6)中的叶绿体DNA溶液与醋酸钠、双蒸水和异丙醇的体积比为2∶2∶4∶5。