[发明专利]一种桶形α芋螺多肽Bt1.3及其应用

说明书

技术领域

本发明涉及生物技术领域，尤其涉及一种桶形α芋螺多肽Bt1.3及其应用。

背景技术

神经性疼痛是一种由中枢或外周神经系统原发性病变或功能障碍而引起的疼痛综合症。神经性疼痛的典型症状包括感觉异常、痛觉过敏和痛觉超敏等。目前许多重大疾病(如癌症、艾滋病、创伤性神经损伤、麻疯病、硬化症、带状疱疹)均可导致神经系统功能的损伤而引发神经性疼痛，临床上常用的药物主要有抗惊厥药(如莱提西酞、奥卡西平)、阿片类药(如吗啡等)和各种抗抑郁药的联用，但是由于毒副作用以及长期用药带来的耐受性、成瘾性等问题，治疗效果不佳。因此，开发新一代高活性、低耐受和非成瘾的镇痛药物十分必要。最新研究表明：神经元型亚型nAChRsα9α10，α7及α3β2与镇痛相关，是发展无致瘾慢性镇痛药物的理想靶点。

α-芋螺毒素(α-CTX)是最早从芋螺毒腺管中纯化出的一类多肽，属于A超家族，一般由9-18个氨基酸组成，含有2对二硫键，框架结构为CCXmCXnC(C代表半胱氨酸，X代表非半胱氨酸，m和n表示非半胱氨酸的数量)，根据m和n的不同，α-CTX被划分为α3/5、α4/3、α4/6、α4/7等亚家族。其中α3/5，如α-MI，主要作用于脊椎动物的肌肉型乙酰胆碱受体，其他亚型则大多选择性地作用于脊椎动物的神经型乙酰胆碱受体的不同亚型(如α3β2、α9β10等)。在镇痛活性研究方面，目前发现Rg1A、Vc1.1、MII三种α-芋螺多肽具有较好的镇痛活性(Callaghan B et al.J Neurosci，2008；28：10943-10951；Young T et al.Brain Res.2008；1229：118-124.)，可以减轻由于创伤、炎症、或神经性损伤引起的疼痛。α芋螺多肽Rg1A、Vc1.1的镇痛作用靶点可能是乙酰胆碱受体α9α10亚型(Vincler et al.PNAS.2006，103(46)，17880-17884)，而MII的作用靶点是乙酰胆碱受体α3β2亚型(Young Y，et al.Brain Res.，2008，1229：118-124)。作用于外周神经系统，可以采用多肽皮下、肌肉或腹腔等给药方式，方便应用。Vc1.1镇痛靶点的最新研究表明，Vc1.1是通过GABAB介导的N型钙通道的抑制而发挥镇痛作用(Klimis H et al.PAIN 2011，152：259-266)，但也有可能与目前未发现的机制相关。

发明内容

本发明的一个目的是提供一种桶形α芋螺多肽Bt1.3。

本发明提供的多肽，其氨基酸序列为序列表中的序列2。

所述多肽的编码基因也是本发明保护的范围。

所述多肽的编码基因为如下(1)或(2)或(3)的DNA分子：

(1)序列表中序列1所示的DNA分子；

(2)在严格条件下与(1)限定的DNA序列杂交且编码具有相同功能多肽的DNA分子；

(3)与(1)限定的DNA序列至少具有70％、至少具有75％、至少具有80％、至少具有85％、至少具有90％、至少具有95％、至少具有96％、至少具有97％、至少具有98％或至少具有99％同源性且编码具有相同功能多肽的DNA分子。

上述严格条件可为在6×SSC，0.5％SDS的溶液中，在68℃下杂交，然后用2×SSC，0.1％SDS和1×SSC，0.1％SDS各洗膜一次。

所述多肽的二硫键的连接方式为Cys1-Cys3和Cys2-Cys4；从所述多肽的氨基端开始的Cys按顺序分别记作Cys1、Cys2、Cys3、Cys4。

所述的多肽在制备镇痛的产品中的应用也是本发明保护的范围。

所述产品为药品。

利用α芋螺毒素信号肽的保守区及3’RACE克隆方法，从中国南海西沙群岛海域的桶形芋螺(Conus betulinus)毒腺管中克隆获得一条新的α4/7型芋螺多肽Bt1.3基因(图1)，NCBI序列比对分析表明该芋螺多肽具有全新的氨基酸组成，与目前报道的α型芋螺多肽在氨基酸组成上具有显著差异。