[发明专利]检测环丙沙星的scFv抗体、其编码基因及应用

说明书

技术领域

本发明涉及免疫学检测领域，具体地说，涉及一种检测环丙沙星的scFv抗体、其编码基因及应用。

背景技术

环丙沙星(Ciprofloxacin，CIP)，化学名称为1-环丙基-6-氟-1，4-二氢-4-氧代-7-(1-哌嗪基)-3-喹啉羧酸，是合成的第三代喹诺酮类抗菌药物，具广谱抗菌活性，杀菌效果好，几乎对所有细菌均具有抗菌活性，在畜牧业生产中广泛使用。但因其具有一定的毒性，在动物性食品中的残留对食品卫生和公共健康产生威胁。

检测环丙沙星残留量的化学分析方法需要昂贵的仪器设备和繁琐的过程，不适合现场监控和大量样本筛查。

发明内容

本发明的目的是提供一种检测环丙沙星的scFv抗体及编码该抗体的基因。

本发明的另一目的是提供上述scFv抗体及其编码基因在检测环丙沙星中的应用。

为了实现本发明目的，本发明的一种检测环丙沙星的scFv抗体，其包括重链和轻链，其中，重链和轻链的氨基酸序列分别如SEQ IDNo.1和SEQ ID No.2所示。

本发明还提供上述scFv抗体的氨基酸序列经替换、缺失或添加一个或几个氨基酸形成的具有同等功能的scFv抗体。例如，在重链上，将第24位的Ala替换为Phe，或是将第89位的Glu替换为Asp；在轻链第96位的Thr添加Ser，或是将轻链第34位的Trp缺失；均不会影响该抗体的功能。

本发明还提供编码上述scFv抗体的基因，其中，编码scFv抗体重链的基因具有SEQ ID No.3所示的核苷酸序列，编码scFv抗体轻链的基因具有SEQ ID No.4所示的核苷酸序列。

本发明还提供含有编码上述scFv抗体的基因的载体。

本发明还提供含有上述载体的宿主细胞。

本发明进一步提供上述scFv抗体、编码该抗体的基因、含有所述基因的载体或含有该载体的宿主细胞在检测环丙沙星中的应用。

本发明还提供上述scFv抗体的制备方法，即将编码上述scFv抗体的基因构建至表达载体中并转化宿主细胞，然后进行蛋白的表达及分离纯化。其中，所述表达载体为PCANTAB5E。

借由上述技术方案，本发明至少具有下列优点及有益效果：

本发明检测环丙沙星的scFv抗体，主要采用竞争性ELISA方法定性或定量检测样品中环丙沙星的残留；对样品的前处理要求低，样品前处理过程简单，能同时快速检测大批样品；采用高特异性的环丙沙星scFv抗体，主要试剂以工作液的形式提供，检验方法方便易行，具有特异性高、灵敏度高等特点。本发明的方法高效、准确、简便、适于大批量样品筛选的定性、定量检测。

附图说明

图1：随机挑选20个scFv-pCANTAB5e重组质粒sfiI和NotI双酶切电泳图，M：DL2000核酸分子量Marker，1～20：scFv-pCANTAB5e酶切产物。

图2：为30个重组菌诱导表达产生可溶性抗体scFv-ELISA结果。

图3：重组菌诱导表达产物SDS-PAGE电泳图，1：重组菌诱导表达上清液，2：重组菌诱导表达胞间质，3：阴性对照。

图4：环丙沙星诱导表达上清中可溶性重组抗体间接竞争ELISA标准曲线。

具体实施方式

以下实施例用于说明本发明，但不用来限制本发明的范围。

以下实施例中使用的试剂盒材料均为市售商品。

实施例1免疫原及检测原的偶联制备

1、材料

牛血清白蛋白(BSA)、卵清白蛋白(OVA)、N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)、1-乙基-(3-二甲基丙基)碳化二亚胺(EDC)、N，N-二甲基甲酰胺(DMF)、环丙沙星(CIP)标准品、透析膜、透析膜处理液、磁力搅拌仪、紫外分光光度仪。

2、方法

采用混合酸酐法，将环丙沙星与蛋白大分子(BSA、OVA)进行偶联，制备免疫原和包被原。

2.1免疫原及包被原合成及纯化

A.中间产物制备

a.取20mg药物置于烧杯中，加入2ml DMF，若溶解不充分，可在超声波中助溶；

b.充分溶解后，加入25mg EDC和20mg NHS，磁力搅拌反应；

c.将以上烧杯用锡箔纸包裹好，室温磁力搅拌反应24小时，此液为A液。

B.合成及初步纯化

a.取50mg BSA(或OVA)溶于6ml PBS(0.01M，pH7.4)中，充分溶解，此液为B液；

b.在磁力搅拌下，将A液逐滴滴入B液中；