[发明专利]一种RNA吸附材料及制备方法无效
申请号: | 201110087430.8 | 申请日: | 2011-04-08 |
公开(公告)号: | CN102151545A | 公开(公告)日: | 2011-08-17 |
发明(设计)人: | 吴心丹 | 申请(专利权)人: | 吴心丹 |
主分类号: | B01J20/12 | 分类号: | B01J20/12;B01J20/30 |
代理公司: | 暂无信息 | 代理人: | 暂无信息 |
地址: | 215004 江苏省苏*** | 国省代码: | 江苏;32 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 一种 rna 吸附 材料 制备 方法 | ||
技术领域:本发明涉及一种RNA吸附材料及使用方法,具体是用酸处理过的坡缕石在酸性环境来吸附RNA;当溶液处于中性环境中时释放吸附的RNA。
技术背景:
对生物样品进行RNA分析的时,需要进行RNA提取、RNA纯化、RNA扩增等。如何保证RNA的完整性、纯度对于RNA的分析至关重要。
目前常用的RNA吸附材料有:(1)表面偶联有二乙胺乙醇(DEAE)的亲水性树脂,该树脂依靠表面DEAE所带正电荷,吸附带负电荷RNA。(2)磁珠;该吸附材料以磁珠为载体,依靠表面羧基化的表面来吸附RNA,而磁珠使得吸附的RNA易于分离出来。(3)其他的硅胶、玻璃等吸附材料也是依靠类似的原理进行RNA吸附。
但是上述这些材料表面亲水性强,极易吸附蛋白,糖类,RNA等水容物,从而使这些吸附材料经几次循环后吸附过多杂质,影响了表面吸附RNA的能力,同时杂质阻塞树脂间隙,使液体流过柱子的速度明显变慢,二是偶连基团与树脂的偶联并不十分稳定,在一经使用后的液体环境中,容易逐步解离。
坡缕石是一种层链状结构的含水富镁铝硅酸盐黏土矿物,1862年因首次发现于苏联的乌拉克地区(坡缕高斯克)而得名。它因质地轻柔,具有较强的吸附性能,坡缕石的一般化学结构式为Mg5(H2O)4[Si4O10]2(OH)2。坡缕石的比表面积达372m2/g,远远高于活化氧化铝、硅藻土、固体硅胶等常用的固体吸附剂。这是因为坡缕石晶形结构中有许多管状贯穿通道,可吸附多种极性与非极性分子物质进入贯穿通道之中,具有很强的吸附力。目前坡缕石已经被广泛用于吸附黄酒中的悬浮沉淀。
此外,坡缕石还具有很强的酸、碱和热稳定性。有试验表明将坡缕石分别浸泡在10%的盐酸和10%的NaOH溶液中,放置48小时后观察,材料膨胀,但不溶解。将坡缕石分别置于丙酮、乙醚、四氯化碳、乙酸乙酯、汽油等有机溶剂中浸泡48小时,材料仍无变化。实验表明,坡缕石对酸、碱、及有机溶剂皆有惰性,化学稳定性好。将天然坡缕石置于800℃的高温炉中灼烧4小时,材料无变化,仍具柔软性。当温度升至1000℃以上时,材料开始发硬,仍具白色。说明坡缕石具有很好的热稳定性。
上述性质表明一方面坡缕石良好的吸附性能可以用于RNA等核酸的吸附,另一方面也表明坡缕石作为一种吸附材料具有极强的稳定性,可以反复循环使用。
本发明正是利用坡缕石经酸处理后晶体产生的孔道所具有的吸附能力从而达吸附RNA的目的。
发明内容:
1、本发明公开了一种新的RNA吸附材料及使用方法。该方法具体如下:天然的坡缕石矿产洗涤、烘干、粉碎后用5.0mol/L盐酸(或2.5mol/L硫酸)在90℃处理1.5小时;处理后于120℃烘干。
将烘干后的坡缕石粉末加入pH为3.5-4.5的RNA溶液中,振荡、混匀后,坡缕石可吸附溶液中RNA;吸附后RNA的坡缕石加入pH为7.0-8.0的溶液中后可释放RNA。
本发明通过以下途径实现:
1、将坡缕石粉末用95%的乙醇溶液中浸泡48小时,浸泡后,材料不溶解,不开裂,分散性能增加;再将坡缕石粉末置于5.0mol/L盐酸(或2.5mol/L硫酸)在90℃处理1.5小时,120摄氏度烘干。
2、将坡缕石粉末加入RNA溶液中,调节反应pH值,使pH值3.5-4.5,反应温度为室温。
3、振荡90秒,让RNA与坡缕石粉末相结合。
4、12000rpm离心5分钟,弃上清。
5、加入pH为7.7-8.0水或低盐溶液,振荡15秒,RNA重新释放到溶液中。
下面结合实施例对本发明进行进一步说明:
实施例1坡缕石的RNA吸附性能
取20mg坡缕石粉末加入1.5ml离心管中,加入1ml 95%的乙醇溶液,振荡混匀后浸泡48小时;浸泡后12000rpm离心,弃上清,常温下凉干。凉干后再将坡缕石粉末置于5.0mol/L盐酸(或2.5mol/L硫酸)在90℃处理1.5小时,120摄氏度烘干。
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