[发明专利]一种知母多糖提取物及其制备方法和医药用途

说明书

技术领域

本发明涉及一种知母多糖提取物和其制备方法，及将该知母多糖提取物用作免疫抑制活性，用于治疗免疫炎性损伤性疾病：肾炎、肺炎、上呼吸道感染、肝炎、扁桃体炎及糖尿病的医药用途。

背景技术

知母为百合科知母属植物知母(Anemarrhena asphodeloides Bge.)的根茎，性味苦、甘、寒，归肺、胃、肾经。具有清热泻火、滋阴润燥功能，用于外感热病，高热烦渴，肺热燥咳，骨蒸潮热，内热消渴，肠燥便秘。现代研究发现知母中的化学成分以甾体皂苷、双苯吡酮类为主，尚有木脂素类、黄酮类、有机酸类等，是现代医药研究中的热点药物之一，近年来的研究进展迅速，但大都集中于知母皂苷类、双苯吡酮类成分上，认为知母皂苷为知母的重要药效物质基础，对知母多糖研究较少，尚未见其具有免疫抑制活性的报道。本发明通过深入的化学、药理学、药效学研究，发明了一种制备知母多糖的新方法，该方法操作简单，经济节能，并且能得到较高纯度和较大含量的多糖组分；同时首次发现知母多糖具有免疫抑制活性，可用于治疗与免疫炎性损伤相关的各种疾病：肾炎、肺炎、上呼吸道感染、肝炎、扁桃体炎及糖尿病。这与知母以往研究中皂苷类、双苯吡酮类药效物质基础的研究是完全不同的。

发明内容

本发明目的之一是提供一种具有免疫抑制活性的知母多糖提取物。

本发明目的之二是提供一种上述知母多糖提取物的制备方法，知母多糖的含量占提取物重量百分比的60％以上。

本发明目的之三是将上述知母多糖提取物制成各种剂型的免疫抑制剂，用于治疗免疫炎性损伤性疾病：肾炎、肺炎、上呼吸道感染、肝炎、扁桃体炎及糖尿病的医药用途。

本发明的上述目的是通过以下技术方案来实现的：

一种知母多糖提取物的制备方法，其特征在于：知母原料药材脱脂后，再经过水提取、醇沉淀得到粗多糖，粗多糖经过透析、离子交换层析脱去蛋白、色素，除去小分子化学成分，制成较高纯度的知母多糖提取物。

一种制备上述知母多糖提取物的方法，其包括以下具体步骤：

(1)将知母用高浓度乙醇回流除去脂溶性杂质；(2)残渣加水回流提取，滤液浓缩，加入乙醇醇沉，离心得沉淀；(3)沉淀依次用无水乙醇，丙酮分别洗涤；(4)洗涤后的沉淀用蒸馏水复溶，透析；(5)透析液浓缩，加入乙醇醇沉，离心得多糖沉淀；(6)多糖沉淀依次用无水乙醇，丙酮分别洗涤；(7)洗涤后的沉淀用蒸馏水复溶，采用弱酸弱碱型阴、阳离子交换树脂串联法脱去多糖中的色素和蛋白质，即得知母多糖提取物。

为了达到更好的提取效果，优选的，步骤(1)中将知母用6～12倍重量的80～95％乙醇回流脱脂2～3次，每次回流2～3h；步骤(2)中将残渣加6～12倍重量的蒸馏水回流提取2～3次，每次回流提取2～3h，将滤液浓缩至药材0.2～1.0体积，加入80～95％乙醇醇沉，离心得沉淀；步骤(3)、(6)中将沉淀依次用2～4倍重量的无水乙醇，丙酮分别洗涤；步骤(4)中的沉淀以0.5～2.0倍重量的蒸馏水复溶，以分子量大小为3.0×10³-1.2×10⁴的透析袋透析24～72h。

将从知母中分离出的多糖依次采用DEAE-Sepharose F.F和DEAE-52离子交换色谱柱(洗脱相为0.1-1mol/L的NaCl溶液)，收集液可以选择但不限于如下琼脂糖凝胶柱色谱做进一步纯化分离：Sephadex G50、Sephacryl S100、Sephacryl 200、Sephacryl S300和Sephacryl S400(洗脱相为0.1-1mol/L NaCl溶液)。本发明知母多糖提取物中总多糖的含量占提取物重量百分比的60％以上，进一步纯化甚至可以得到知母多糖单体。

所述的知母多糖提取物，具有免疫抑制活性：对小鼠单核巨噬细胞吞噬功能呈抑制作用，提示具有非特异性免疫抑制功能；降低绵羊红细胞所致实验大鼠溶血素生成的含量，表示具有体液免疫抑制功能。知母多糖提取物通过免疫抑制机制，可用于治疗免疫炎性损伤性疾病：肾炎、肺炎、上呼吸道感染、肝炎、扁桃体炎及糖尿病。

本发明知母多糖提取物可以加入制备不同剂型时所需的各种辅料和药学上可接受的载体、赋形剂或稀释剂后，以常规的中药制剂方法制备成任何一种适宜的临床制剂，例如可以是注射剂(粉针、冻干粉针、水针、输液等)、口服制剂(片剂、口服液、颗粒剂、胶囊剂、软胶囊或滴丸)等。

具体实施方式