[发明专利]一种固相萃取柱及其应用

说明书

技术领域

本发明涉及一种固相萃取柱及其应用，具体说，是涉及一种凝胶固相萃取柱及其在生物样品前处理中的应用。

背景技术

由于生物样品的成分复杂，基质干扰严重，因此对生物样品中的内源性物质分析检测，一直被分析工作者所关注。一般所采取的生物样品前处理方法包括有机溶剂沉淀法(OSP)、液液萃取(LLE)、固相萃取(SPE)、固相微萃取(SPME)等。其中固相萃取以其操作简单、回收率高、重复性好、较绿色环保等特点而被广泛应用。

固相萃取根据吸附剂的不同可分为反相固相萃取、正相固相萃取、离子交换固相萃取和吸附固相萃取四种，需要根据所要检测的化合物的性质来选择不同吸附剂的固相萃取柱。固相萃取法，是主要通过固相填料对样品组分的选择性吸附及解吸过程，实现对样品的分离、纯化和富集，其主要目的在于降低样品基质干扰，提高检测灵敏度。为了方便，固相萃取一般使用固相萃取小柱，根据不同的需求有各种规格，常见的有1ml、6ml和10ml。但在具体使用中，这种方法存在如下问题：

1)预装固相萃取柱不可反复使用，使用进口固相萃取柱的成本很高；

2)要根据目标化合物的极性及溶解度选择合适的固相萃取柱和洗脱溶剂，具体洗脱过程需要进行大量前期文献考察和实验摸索；

3)若目标化合物与吸附剂形成共价键，则在洗脱时可能会因与吸附剂死吸附而无法洗脱下来；

4)使用时萃取流速低，影响样品处理效率，需要外界给予一定的压力；

5)无法同时富集分子量大小相似的化合物。

在固相萃取法中最常用的填料是颗粒型硅胶或键合相的硅胶。传统的颗粒型填料为了能实现较高的吸附效率，减少样品的损失，其填料的颗粒较小，而小的颗粒粒度却会引起高的柱压，吸附时间长，因此不能用于快速高效分离和富集。

发明内容

本发明针对上述现有技术所存在的缺陷和问题，提供一种具有操作简单、成本低、灵敏度高、能快速高效分离和富集分子量相近的中、小分子化合物等优点的固相萃取柱及其在生物样品前处理中的应用。

为实现上述发明目的，本发明采用的技术方案如下：

一种固相萃取柱，包括玻璃柱和填料，其特征在于：所述填料为羟丙基葡聚糖凝胶Sephadex LH-20。

所述玻璃柱的长径比推荐为1∶1～30∶1，较佳为10∶1～20∶1，最佳为15∶1。

本发明提供的固相萃取柱在生物样品前处理中的应用，主要是起分离和富集分子量相近的中、小分子化合物的作用。

所述的生物样品包括但不仅限于体液和组织匀浆，所述的体液主要是指血清和尿液。

所述的分子量相近的中、小分子化合物主要是指血管紧张素类寡肽化合物、磷脂类化合物、胆汁酸类化合物和氨基酸类化合物。

所述的固相萃取柱在生物样品前处理中的应用，包括如下步骤：

a)制作固相萃取柱；

b)将生物样品溶液注入柱中，待样品溶液全部渗入固定相后，注入萃取液，根据目标分析物选取所要收集的萃取液的体积；

c)浓缩干收集的萃取液中的溶剂；

d)复溶目标物，进行高效液相色谱或高效液相色谱-质谱分离检测。

Sephadex LH-20凝胶的主要分离原理是分子筛，在反相溶剂中兼具反相分配的作用。由于Sephadex LH-20凝胶的分子筛作用，所以分子大的化合物保留弱，先被洗脱下来，分子小的化合物保留强，后被洗脱下来。本发明利用Sephadex LH-20凝胶的这一特性和固相萃取柱的优点，一方面可以分离生物样品中如蛋白质等大分子化合物，排除其干扰，另一方面可富集分子量相近的中、小分子化合物。因此，与现有技术相比，本发明的固相萃取柱可应用于血清、尿液及组织匀浆中的中、小分子的同时富集及分析检测，可以有效排除干扰，保证待测物分析的高灵敏度、强专属性、高准确度，对于生物体代谢组学研究以及疾病的检测具有良好的指导意义。另外，本发明的固相萃取柱可反复使用，几乎不存在死吸附的现象，而且装填容易，操作简单，在生物样品分析中具有较强的应用价值。

附图说明

图1是血清经本发明的固相萃取柱处理得到的血管紧张素类寡肽化合物的分析图谱。

图2是血清经本发明的固相萃取柱处理得到的磷脂类化合物的分析图谱。

图3是肝脏匀浆经本发明的固相萃取柱处理得到的胆汁酸类化合物的分析图谱。

图4是尿液经本发明的固相萃取柱处理得到的氨基酸类化合物的分析图谱。

具体实施方法