[发明专利]蛋白组合物及其在制备肺癌诊断试剂盒中的应用

说明书

技术领域

本发明属于分子生物学、临床检测技术领域，具体涉及包含P53、P63、Ki67、MCM7、及EGFR五个蛋白的蛋白组合物，以及所述蛋白组合物在制备肺癌，特别是肺鳞癌和肺腺癌诊断试剂盒中的应用。

背景技术

肺癌是当今世界各国最常见的恶性肿瘤，对人类健康和生命构成极大威胁。美国2010年统计数据显示，肺癌的死亡率在男性和女性均位于身体各部位肿瘤的首位，分别为29％和26％。新发病例在男性和女性中均占第二位，分别为各部位肿瘤总和的15％和14％。1999-2005年间美国肺癌的5年生存率为16％，其中局灶性者5年生存率为53％，有局部淋巴结转移者为24％，有血行远处转移者仅为4％。欧洲肺癌的总体5年生存率为10.9％，远远低于乳腺癌和前列腺癌的79％和78％。

在我国，卫生部全国肿瘤防治办公室提供的资料显示，自2000-2005年间，中国肺癌的发病人数估计增加12万人，其中男性肺癌患者从2000年的26万人增加到2005年的33万人，同期女性肺癌患者从12万人增加到17万人。目前我国肺癌发病率每年增长26.9％，如不及时采取有效控制措施，预计到2025年，我国肺癌患者将达100万，成为世界第一肺癌大国。尽管近年在诊断方法、手术技术以及化疗药物方面均有新的发展，但肺癌患者总的5年生存率仍非常低。在我国，肺癌每年约致400,000例患者死亡。肺癌总体5年生存率之所以这么低，主要因为多数肺癌患者就诊时已处于晚期，或较早就出现播散转移，所以降低肺癌患者死亡率的关键在于早期预警、早期发现，以便早期干预。研究显示I期肺癌术后10年生存率可达到92％。

目前常用的肺癌筛查方法包括胸部X线、低剂量螺旋CT(low-dosespiral CT，LDCT)、痰液细胞学检查、支气管镜下刷片或取活检、支气管肺泡灌洗液细胞学检查等，但各种检查手段在敏感性、特异性、适用度等方面均存在局限。

除了以上的物理性检查方式之外，目前临床上也有应用血清肿瘤学标志物诊断肺癌。常见的标志物包括癌胚抗原(CEA)、鳞状细胞癌相关抗原(SCC-Ag)、细胞角蛋白21-1片段(CYFRA21-1)、糖类抗原125(CA125)、糖类抗原153(CA153)、糖类抗原199(CA199)、神经元特异性烯醇化酶(NSE)、组织多肽抗原(TPA)等。但这些肿瘤标志物单独检测其敏感性和特异性均有限，联合检测虽有所提高，但依然面临许多良性病变如良性肿瘤、炎症、退行性疾病等也会引起这些肿瘤标志物血清学水平增高的问题。进一步探索高效特异的肺癌标志物、特别是早期预警的标志物极其重要。

肺癌可分为非小细胞肺癌和小细胞肺癌，各占肺癌的85％和15％。其中非小细胞肺癌又包括鳞癌、腺癌和大细胞癌。因鳞癌和腺癌在被诊断出的患者中占大多数，目前对这两种类型肺癌发生发展的分子机制研究较多。

综合目前的研究，与肺癌发病机制相关的基因改变涉及到细胞周期调控、细胞增殖与分化、DNA修复以及细胞凋亡等(如p53、CCND1、ki-67、Telomerase、TTF1等)，而染色体结构的异常与基因表达水平的改变也可导致肿瘤发生。近年的研究证明，有些分子改变是顺序发生，它们出现的频率与癌前病变的发展程度(鳞状上皮化生-不典型增生-原位癌；非典型腺瘤增生-腺癌)同步升高。因此，以分子水平异常作为肺癌的肿瘤标志物能更恰当地反映肿瘤生物学行为的异质性，进而为肺癌的预警提供更有价值的指导。

尽管取得了一些研究进展，但迄今为止，尚无任何确定的分子标志可真正用于肺癌的预警。因此，本领域迫切需要研究出可用于肺癌早期诊断的标志物或标志物组合，以及可有效检测肺癌，尤其是早期检测肺癌的方法。

发明内容

本发明的目的在于提供一种可有效检测肺癌，特别是早期肺癌的蛋白组合物，所述早期肺癌优选为早期肺鳞癌和早期肺腺癌。该组合具有以下特征：

(a)在肺癌患者组织中高表达，在手术切端组织中低表达或不表达；

(b)在结核、炎症、肺隐球菌病等其它非癌性肺部病变组织中低表达或不表达；

(c)在肿瘤患者支气管刷检标本中强表达，在肺部炎症、结核及其它良性病变中低表达/不表达；

(d)健康体检人群中此蛋白组合表达阳性者发生肺癌风险增高。

在本发明中，发明人通过不懈的努力，从大量的癌症标志物蛋白中筛选得到用于肺癌诊断的蛋白标志物组合，所述蛋白标志物的组合物包括以下五种蛋白，P53、P63、Ki67、MCM7及EGFR。

具体地，本发明涉及以下几个方面：