[发明专利]一类罗丹明B衍生物的应用

说明书

技术领域

本发明涉及一类具有分子内螺环的罗丹明B衍生物作为细胞溶酶体荧光染色剂的用途。

背景技术

溶酶体(lysosome)是真核细胞中的一种细胞器，其内部环境呈弱酸性(pH 4～6)，含有多种水解酶。溶酶体不但具有细胞内的消化功能，还与细胞自吞噬、凋亡、免疫防御、癌症的发展有直接的关联(1、Luis Avila J.[Structure and function of lysosomes].Acta Cient Venez.1974；25：130-131；2、Luzio JP，Pryor PR，Bright NA.Lysosomes：fusion and function.Nat Rev Mol Cell Biol.2007；8：622-632；3、Kroemer G，Jaattela M.Lysosomes and autophagy in cell death control.Nat Rev Cancer.2005；5：886-897)，因此开发和应用能够标记并追踪活细胞中溶酶体的分子探针对于研究溶酶体的生物功能，以及活体癌细胞的诊断都有重要的意义(4、Groth-Pedersen L，Ostenfeld MS，Hoyer-Hansen M，Nylandsted J，Jaattela M.Vincristine induces dramatic lysosomal changes and sensitizes cancer cells to lysosome-destabilizing siramesine.Cancer Res.2007；67：2217-2225；5、Urano Y，Asanuma D，Hama Y，et al.Selective molecular imaging of viable cancer cells with pH-activatable fluorescence probes.Nat Med.2009；15：104-109)。

现在已有多种可以标记溶酶体的分子探针，用于研究溶酶体的生物功能。这些探针大多含有弱碱性的取代基团，可以选择性聚集在低pH值的溶酶体内，如最常用Invitrogen开发的向酸性荧光探针(lysotracker green DND-26等)。该类探针的常见缺点包括(1)背景信号比较高，导致非特异性标记；(2)稳定性低，容易被光淬灭，丧失荧光性能；(3)在细胞内的保留期短，随时间的延长，细胞内探针容易流失。

根据文献报道用罗丹明B和含氨基的化合物乙二胺，丙二胺和N，N-二甲基乙二胺制备了一类具有分子内螺环的罗丹明B衍生物(6、Wu J，Hwang I，Kim KS，Kim JS.Rhodamine-based Hg2+-selective chemodosimeter in aqueous solution：fluorescent OFF-ON.Organic Lett，2007，9(5)：907-910)。该类衍生物在进入细胞溶酶体后，溶酶体内的弱酸性环境激发该类衍生物发生异构化，使之成为可以发荧光的分子，并且其荧光强度随溶酶体内pH值的改变而发生变化，即具有酸敏感性，并且该类衍生物具有低背景、高稳定性和在细胞内保留期长的优点。

发明内容

本发明的目的在于提供一类罗丹明B衍生物的应用。

所述一类罗丹明B衍生物的化学结构式如下：

R＝-NH₂，-N(CH₃)₂，-CH₂-N(CH₃)₂

所述一类罗丹明B衍生物是一类具有分子内5员环罗丹明B衍生物，所述一类罗丹明B衍生物可作为细胞溶酶体荧光染色剂用于高选择性、长期稳定标记细胞溶酶体。

所述一类罗丹明B衍生物的结构特征在于衍生物具有分子内5员环。

合成含有罗丹明B衍生物的原料之一为罗丹明B，合成罗丹明B衍生物的原料之二为含有氨基化合物，所述氨基化合物的结构特征在于分子的一端含有一个一级氨基；合成罗丹明B衍生物的原料之二的含有一级氨基的化合物的另一端可以含有其它取代基，如一级氨基，二级氨基，三级氨基等；合成含有罗丹明B衍生物的原料之二是含有一级氨的化合物；该类化合物的结构特征在于一级氨取代基与分子另一端的取代基之间间隔至少2个亚甲基。