[发明专利]一种抗菌肽组合物及其制备方法

说明书

技术领域

本发明属于生物药物制剂领域，特别涉及一种稳定抗菌肽制剂组方及其制备方法。

发明背景

抗菌肽(antibacterial peptides，ABP)是生物体产生的一种具有强抗菌作用的阳离子小肽，是生物先天免疫的重要组成成分。迄今为止，已在许多生物包括昆虫、鸟类、动物、植物及原核生物中发现2000多种抗菌活性肽。效果研究表明，抗菌肽不但广谱抗菌，能抑杀耐药性菌株，而且它的杀菌机制使病原菌不易产生耐药性突变，从而成为最具开发前景的抗生素替代品之一。

抗菌肽具有广谱抗菌活性，并且发现其中有些种类具有抗肿瘤、病毒、真菌的能力。近年实验研究表明，抗菌肽能促进伤口愈合。抗菌肽能刺激纤维母细胞、淋巴细胞和血管内皮细胞的增殖，促进肉芽组织增生，加快创面愈合，用抗菌肽Cytoporin和磺胺嘧啶银制成的软膏治疗小白鼠烧伤，比单纯用磺胺嘧啶银伤口愈合快，疤痕小。Shahabuddin等(1998)发现昆虫抗菌肽对感染蚊子的疟原虫发育的不同时期有不同的作用，主要对疟原虫的卵囊期和子孢子期造成明显损伤。Efron等(2002)报道，从南美叶泡蛙皮肤得到的抗菌多肽demasepin对疟原虫显示抑制作用。

由于抗菌肽独特的抗菌机制，成为最具开发前景的抗生素替代品。现在国内外研究比较热的抗菌肽，包括有天蚕素(cecropin)，哺乳动物和人的防御素，人的BPI(杀菌/渗透-增强蛋白)，两栖动物的magainins等，蜜蜂的蜂毒中提取的蜂毒素等等。而通过DNA重组技术来获得基因工程抗菌肽，则成为抗菌肽研究的热点。

抗菌肽结构特点：各种抗菌肽有相似的一级结构，由二十几至五十几个氨基酸组成的短肽，一端为亲水性，另一端为疏水性。二级结构形成两亲α螺旋或β-折叠。属于碱性肽，带多个正电荷，水溶性好。研制长效、稳定的抗菌肽缓释制剂，是制剂专家不断研发的重要课题。本发明通过系统研究，研制出了长效一种稳定、透皮效果好的抗菌肽组合物，此组合物在临床使用中既可以涂抹、浇泼、喷洒，也可以注射，使用途径多样，并且透皮稀释效果明显增强，具有重要的应用价值。

发明内容

发明人经过深入、细致试验，研发出了在pH5.0-7.0之间稳定的抗菌肽组合物，该组合物不需要添加血清白蛋白，主要成分容易获得，组合物稳定大大提高，透皮效果更好。

本发明涉及一种稳定、透皮效果好的抗菌肽组合物及其制备方法，含有：抗菌肽或修饰后的抗菌肽、保护剂、张力剂、促渗剂、pH缓冲物质、辅料；各组分重量含量为：

本发明所包含的抗菌肽可以是从动物、植物、微生物中分离得到的，可以是基因工程方式表达的，可以是修饰过的或未修饰过的。

本发明所选用的保护剂为甘氨酸、精氨酸、赖氨酸、甘露醇、山梨醇中的一种或多种；保护剂的优选比例为：甘氨酸、精氨酸、赖氨酸0.1％-1.0％(W/W)，甘露醇、山梨醇1％-10％(W/W)。

本发明所选用的张力剂为0.1％-1％(W/W)的氯化钠或氯化钾。

本发明所选用的促渗剂选自中链脂肪酸钠盐、胆酸盐中的一种或多种；其中中链脂肪酸钠盐选自辛酸钠、癸酸钠、月桂酸钠和油酸钠中的一种或多种，胆酸盐选自去氧胆酸钠、鹅去氧胆酸钠、甘氨胆酸钠和牛磺胆酸钠中的一种或多种。

本发明的组合物要包括pH缓冲物质，所选用的pH缓冲物质选自NaH₂PO₄-Na₂HPO₄、柠檬酸-柠檬酸钠两种缓冲体系，使用比例为0.1-18％(W/W)。

所述辅料选自葡萄糖、果寡糖、壳寡糖中的一种或两种以上组合。

本发明通过以下制备方法获得：

①先将张力剂、pH缓冲盐、促渗剂与适宜的辅料进行等量倍比稀释，充分混合均匀；

②将保护剂与抗菌肽充分混合均匀；然后用辅料倍比稀释两次；

③将上述两种混合物和剩余的全部辅料进行混合，混合均匀后，即得所述组合物。

本发明所述的抗菌肽组合物，在2-8℃下贮藏24个月后仍然保持着抗菌肽的高化学、生物学稳定性。

本文在说明用于本发明制剂中的抗菌肽时，使用的术语“高化学稳定性”指制剂中的抗菌肽在2-8℃下贮藏24个月后，化学完整性保持至少85％。使用的术语“高生物学稳定性”指本发明制剂中的抗菌肽在2-8℃下贮藏24个月后，生物学活性保持至少85％，(参见实施例2表1中的结果)，该生物学活性采用抑制液体生长菌活性测定方法(具体见附件1)进行。

本发明的技术优势