[发明专利]高血压易感基因WNK1基因rs2255390位点的检测方法及其检测试剂盒

说明书

技术领域

本发明涉及分子生物学和医学领域。更具体地，涉及人WNK1基因的 (single nucleotide polymorphism, SNP)位点rs2255390及其与原发性高血压相关性的检测。本发明还涉及检测这个SNP位点的方法和试剂盒。

背景技术

原发性高血压（essential hypertension, EH）是一种多因素、多基因疾病，由环境与遗传因素共同致病的常见而多发的心血管病症，对人类健康造成了极大的影响。随着分子医学的发展，目前已经发现的高血压相关基因已经有150余种，但是EH的发病机制仍然不完全清楚，高血压的早期诊断和预防问题仍然未能完全解决。EH是遗传因子和环境共同作用的结果，血压的变化30%-60%归因于遗传。由于环境因素是可以控制和确认的，而对高血压遗传学因素却是固定不变的。因此，对可变因素的控制，如对高血压危险因素的预防，可以在一定程度上延缓和防止高血压的发病，但是对固定不变的遗传因素的认识不足却在一定程度上严重影响着对高血压发病、诊断和治疗。因此对高血压遗传学的研究十分必要（王佐广，温绍君，吴兆苏.高血压、易感基因与单核苷酸多态性[J].高血压杂志，2001，9：259-264）。

近二十余年来，有关高血压治疗的研究更多地集中在对血压的控制和对靶器官的保护，并已取得突飞猛进的发展。但是，这些手段并不能从根本上控制血压，目前对人类内源性抗高血压基因的研究还很少，因此，研究内源性抗高血压机制是今后高血压防治研究的主要方向之一，具有重要的研究价值和应用前景，如果通过调节内源性抗高血压机制治疗高血压病，将会促进我国生物医疗技术的发展，并为我国每年节省巨大的医疗费用。

WNK1基因在基因组DNA的跨度为156kb，有28个外显子，其单核苷酸多态性位点在100个以上。WNK1基因突变导致WNK1在肾远曲小管表达增加，肾小管钠离子重吸收增加，而钠离子平衡失调是原发性高血压发病的主要机制之一，有学者提出WNK1的基因突变也可能与EH的发病有关（Achard, J.M., Warnock, D.G., Disse-Nicodeme, S., Fiquet-Kempf, B.,Corvol, P., Fournier, A. and Jeunemaitre, X. Familial hyperkalemic hypertension: phenotypic analysis in a large family with the WNK1 deletion mutation. Am J Med, 2003;114: 495–498.），是EH的候选基因之一。目前对WNK1基因与EH的研究较少，没有证实rs2255390与EH相关性的报道。

综上所述，为了最终实现治疗高血压，本领域迫切需要寻求原发性高血压易感基因，并开发检测原发性高血压易感基因的方法、试剂盒，以及相关的治疗药物。

发明内容

   本发明的目的是提供一种检测（包括早期诊断）高血压易感基因多态性位点的方法及检测试剂盒。

本发明提供了一种高血压易感性基因多态性位点的检测方法，即检测WNK1基因rs2255390 位点的基因型, rs2255390带有GG基因型的个体高血压的发病风险显著高于普通人群。

所述的rs2255390位于WNK1的内含子序列中（片段重叠群contig：NT_009759.16位置939762 A/G）。其中，脱氧核糖核酸（DNA）序列编号：rs2255390位置基于SEQ ID NO：1/6；引物1基于SEQ ID NO：2/6；引物2基于SEQ ID NO：3/6；探针1基于SEQ ID NO：4/6；探针2基于SEQ ID NO：5/6；扩增产物基于SEQ ID NO：6/6。

具体而言，该方法包括步骤：（a）抽提样品的基因组DNA，扩增获得 WNK1基因相关内含子序列；(b)检测步骤（a）产物中单核苷酸多态性位点rs2255390的基因型。

所述的扩增WNK1基因内含子序列的引物序列如SEQ ID NO 2 和SEQ ID NO 3所示。

所述的检测rs2255390的基因型的探针序列如SEQ ID NO 4 或者SEQ ID NO 5所示。

上述方法中涉及的测序、扩增、抽提基因组DNA等技术均可采用本领域的常规操作方法。例如，所述的扩增可以采用聚合酶链反应；其中，退火的温度是60摄氏度。循环数为25-45。

本发明提供了一种检测高血压易感基因的试剂盒，它含有与位点rs2255390结合的探针。